微生物快速检测技术与原理教案分析.pptVIP

优点：速度非常快，尤其是激光扫描技术 缺点：耗材太贵、维护保养比较复杂 流式细胞技术需要复杂的前处理 激光扫描技术只适合于可过滤样品 流式细胞技术和激光扫描技术的优缺点 显色培养基法：技术成熟，产品很多。 免疫学方法：产品最多，特异性和敏感性都很高，但有假阳性存在，阳性结果需要确认。通常的原理有ELISA、荧光酶免、免疫磁分离等方法。市场上的产品多。 分子生物学方法：以基因探针检测法和PCR法为主。 基因芯片：研究热点。 显色及荧光底物技术 显色及荧光底物: 由化学及合成技术获得 特殊酶天然裂解相似结构的分子 酶裂解时释放发色及荧光混合物 专一性酶活性，目视观察 底物结构 共价键 (糖苷的, 肽聚, 磷酸二氢聚 …) 由酶进行专一性识别 糖类 脂类 蛋白胨 色 原 底 物 结 构 共价键结合 专一酶 糖类 脂类 蛋白胨 色原 非裂解底物: 不显色 糖类 脂类 蛋白胨 色源 游离或二聚物 可显色 ALOA ? 原理: Beta-glucosidase activity Blue colonies Β-葡萄糖苷酶活性，蓝色 Phospholipase activity Opaque halo 磷酸酶活性，混浊晕 Listeria spp. Listeria monocytogenes 免疫磁分离法+定量PCR—Matrix公司的免疫纯化系统 ELISA方法—3M Tecra 公司的免疫捕获快速检测(略) GLISA---胶体金免疫层析致病菌快速检测条(略) 荧光酶免—Vidas系列产品(略) Pathatrix　Auto免疫纯化 15分钟 定量PCR快速确认 1hr 基因探针法及PCR方法在国外已经有相当成熟的表现。 有普通PCR，荧光PCR，实时荧光PCR（定量PCR）等多种方法。 基因探针法一般也需要增菌，然后加探针试剂杂交，然后在荧光显微镜或荧光检测器下获得结果。 PCR方法一般不需增菌太长时间，通过PCR方法对待测微生物的特征片断进行扩增，然后通过凝胶电泳或荧光PCR技术判断结果。 试剂盒开发相对比较容易，只要找出特征的基因片断，合成出引物即可。 目前客户比较关注的致病菌，包括沙门氏、李斯特氏、大肠杆菌O157、副溶血弧菌、霍乱弧菌、志贺氏菌等均有PCR试剂盒供应。 BAX Gene-trak Gen-probe Vermicon …… 分子生物学方法检测致病菌，特异性较强，技术较为前沿，特别是相对国标方面来说。 但国外用户反映其假阳性概率仍然较高，因此只能作为一种初筛方法。 速度方面：仍然需要增菌，一般是第二天出结果，与免疫法比没有速度优势 目前不少产品已经通过AOAC的认证。 全自动，减少人为干扰 高通量 一次尽可能完成多个检测项目：如芯片技术，串联柱 * * 优点：缩短培养时间，提高灵敏度，适合于菌数较低的可过滤产品使用。 缺点：仪器较昂贵，运行成本比较贵。 基于MPN(最大近似值)原理，实现自动计数 Tempo 将一定浓度的样品稀释液加入定量的专用培养基后，通过充填方式将样品液充填至48孔测试卡后，经适当的培养（细菌总数测定要求37℃培养40h），根据各孔道内细菌的生长状况，由读卡站进行荧光检测，自动读取结果并换算出样品中的目标菌数值。 优点： 自动动化程度高一些。 缺点：主要用于检测菌落总数 耗材成本昂贵 英国DWS公司的Rabit 奥地利Sylab公司的Bactrac4300 日本的DOX Bactrac4300 DWS Rabit Detection Time (DT) 电导率单位 对数期 稳定期 界限值 IDT与样品中的菌数的对数呈线性关系 校准曲线表示菌数对数与IDT的关系 校准时，同时做电化学法和标准方法，将菌数与IDT填入表格中，自动生成标准曲线，并自动计算相关系数及离散度。 Log cfu＝A (DT) + b 优点：检测成本低，检测时间明显缩短。 可用于微生物生长曲线测定，微生物抑菌研究，防腐剂和消毒剂研究等领域。 缺点：仪器较昂贵，定量检测时需要校正曲线。 目前只能检测细菌总数、大肠菌群和大肠杆菌 方法的准确性和检测精度值得考虑 需要专用的电极盒，试剂相对也比较贵 美国的Soleris、Biolumix 法国的BacT/Alert 3D Biolumix 微生物生长导致培养基 pH值发生变化，由光学 检测器检测底部琼脂层 的颜色变化，记录达到 突变点的时间。 培养基内含有颜色指示剂 与阻抗法类似，可以实现快速检测。 缺点：需要购买原厂的预装培养基，应用范围受限制，成本高昂。 与阻抗法类似，可以实现快速检测。 缺点：需要购买原