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第五章分子发光分析法 分子发光分析法 荧光 磷光 化学发光 生物发光 散射光 本次课内容 荧光分析法概述 5.1 分子荧光和磷光分析 荧光和磷光的产生 激发光谱和发射光谱 荧光与物质分子结构的关系 概 述 荧光光谱的范围较广，可以从X光到红外光谱区。 某些物质受紫外光照射后能发射比吸收的紫外光波长更长的紫外光荧光或可见荧光。 概 述 一种物质能否发射荧光，取决于它 的分子结构和它所处的环境条件。 概 述 分子结构：分子中含有共轭双键体系，具 有吸收辐射能，产生电子跃迁 的性质。 环境条件：适当的辐射能照射，合适的温 度、溶剂、酸碱度等。 5.1 分子荧光和磷光分析 5.1 分子荧光和磷光分析 激发态 第一激发态最低振动能级 基 态 分子的激发态 分子的激发态 图示： 分子的激发态 分子的激发态 去活过程及荧光的产生 激发态较高能级 激发态较高能级 激发态最低能级 基态各能级 去活化过程 处于激发态各不同振动能级的分子 无辐射跃迁  去活化过程 激发态最低振动能级 2. 激发光谱和发射光谱 激发光谱：将激发光的光源用单色器分光，测定不同波长照射下所发射的荧光强度（F），以F做纵坐标，激发光波长λ做横坐标作图。 激发光谱反映了激发光波长与荧光强度之间的关系。 2. 激发光谱和发射光谱 发射光谱：固定激发光波长，让物质发射的荧 光通过单色器，测定不同波长的荧光强度，以 荧光强度F做纵坐标，荧光波长λ做横坐标作图。 荧光光谱反映了发射的荧光波长与荧光强度的 关系。 荧光（发射）光谱的特性 （1）stokes位移 （2）荧光光谱的形状与激发光波长无关，不同波长激发光只对荧光强度有影响。 （3）镜像规则 荧光光谱与吸收光谱呈镜像对称。 3. 荧光和分子结构的关系 发射荧光的物质应同时具备以下两个条件： 物质分子必须具有能够吸收紫外或可见光的 结构，并且能产生π π* 或 n π* 跃迁。 荧光物质必须有较大的荧光量子产率。 3. 荧光和分子结构的关系 3. 荧光和物质分子结构的关系 （1）跃迁类型 π π* 较 n π* 跃迁的荧光效率高。 3. 荧光和分子结构的关系 （3）刚性平面：分子的刚性及共平面性越大，荧光量子产率就越大。 3. 荧光和分子结构的关系 （4）取代基效应：在芳香化合物的芳香环上，进行不同基团的取代，对该化合物的荧光强度和荧光光谱都会产生影响。 增强荧光的取代基 — -OH、-OR、-NH2、 -NHR、 -NR2等给电子基团； 减弱荧光的取代基 — COOH 、-NO2 、-COOR 、 -NO、-SH 吸电子基团； 小结：荧光、磷光的产生 预 习： 溶液的荧光强度（P93） 荧光光谱仪（P95） 分子荧光分析法的应用（P97） 复 习 荧光、磷光的产生 激发光谱、发射光谱 化合物分子结构与荧光的关系 本次课内容 影响荧光强度的因素及溶液荧光的猝灭（P93~95） 荧光强度与溶液浓度的关系(P93) 荧光分光光度计(P95) 分子荧光分析法的应用(P97) 1. 影响荧光强度的因素（P93） 1. 影响荧光强度的因素 1. 影响荧光强度的因素 (3) pH值的影响 当荧光物质本身是弱酸或弱碱时，溶液pH