基因工程总结资料.docVIP

PDF1 CTAB法(植物DNA提取的经典方法) ?原理 –CTAB（cetyltrimethyl ammonium bromide，十六烷基三甲基溴化铵），是一种阳离子去污剂，可溶解细胞膜，并与核酸形成复合物。 –该复合物在高盐溶液中（0.7mol/L NaCl）是可溶的，通过有机溶剂抽提，去除蛋白、多糖、酚类等杂质后加入乙醇沉淀即可使核酸分离出来。 注：CTAB溶液在低于15℃ 时会形成沉淀析出，因此在将其加入冰冷的植物材料之前必须预热，且离心时温度不要低于15℃。 tris-HCl （pH8.0）提供一个缓冲环境，防止核酸被破坏； ? EDTA-2Na 螯合Mg离子，抑制DNase（DNA酶）活性； ? NaCl 提供一个高盐环境，使DNA充分溶解，存在于液相中； ? CTAB溶解细胞膜，并结合核酸，使核酸便于分离；高盐溶液中可溶 ? β- 巯基乙醇是抗氧化剂，有效地防止酚氧化成醌，避免褐变，使酚容易去除 酚\氯仿：使蛋白质变性，抽提液分相，苯酚又可抑制DNA酶的降解作用，氯仿可以去除RNA酶。 异戊醇：降低张力，消除泡沫 乙醇：能与水以任何比例互溶，在抽提液中与DNA争夺水分子（脱水），使DNA分子沉淀出来 TE溶液，溶解DNA，提供缓冲环境，保存DNA 植物材料、液氮研磨、细胞裂解、裂解液、抽提、上层溶液、酒精沉淀、离心洗涤、干燥溶解、DNA溶液 材料准备：基因组