细胞固定化综述及实验报告.docVIP

1 细胞固定化技术 1.1细胞固定化技术概要 1.1.1 固定化细胞[1] 固定化细胞是在固定化酶的基础上发展起来的新技术，即一项利用物理或化学手段将游离的微生物（细胞）或酶，定位于限定的空间区域，并使其保持活性且能反复利用的技术。 由于固定化细胞保持了细胞的生命活动能力，它不但比游离细胞的发酵更具有优越性，而且比固定化酶有更多的优点，因为固定化细胞省去了制备酶或含酶细胞处理过程所需要的完整酶系.并能不断产生新酶及其所需的辅助因子，而且固定化方法较简单，成本也较低。.1.2 固定化细胞的优缺点[2] 固定化细胞主要具有6个优点：一是不需要将酶从微生物细胞中提取出来并加以纯化，酶活力损失小、成本低。二是细胞生长停滞时间短，细胞多、反应快，抗污染能力强，可以连续发酵，反复使用，应用成本低。三是酶处于天然细胞的环境中，稳定性高。四是使用固定化细胞反应器，可边加入培养基，边培养排出发酵液，能有效地避免反馈抑制和产物消耗。五是适合于进行多酶顺序连续反应。六是易于进行辅助因子的再生，因而更适合于需要辅助因子的反应，如氧化还原反应、合成反应等。当然，固定化细胞也存在一些缺点，主要表现为：必须保持菌体的完整，防止菌体的自溶，否则会影响产物的纯度；必须抑制细胞内蛋白酶的分解作用；由于细胞内有多种酶存在，往往有副产物形成。为防止副产物必须抑制其他酶活力；细胞膜或细胞壁会造成底物渗透与扩散的障碍。.2固定化细胞的特性[2] 1.2.1 形态学特征 固定化细胞多为球形颗粒，但也有制成立方块或膜状的。用吸附法时，则取决于吸附物质的形状。在球形固定凝胶内，细胞的分布并不均匀，而是接近于球的外表面。有时细胞会在凝胶内的小泡中繁殖，直到最后充满整个可利用的空间。 .2.2 生理学特征 固定化细胞必需具有生命活力，因此创造良好的细胞载体或基质，选择恰当的固定化方法和生物反应器，最佳的反应溶液和周围微环境，维持细胞适度的生长和繁殖等尤为重要。如果生长繁殖过度，容易使细胞泄漏出来，增加扩散障碍。破坏固定细胞的载体或基质。 .2.3 理化环境特征 固定化细胞的微环境对固定化细胞活力的发挥有很大的影响。如丙乙烯醇已经用于降低固定化细胞内水的活度，水的吸附程度并影响微生物细胞的吸附。固定化细胞的呼吸生长速度、扩散速率以及代谢作用等。 .2.4 生物膜的动力特征 研究结果表明，微生物细胞首先吸引到物体表面，继而分泌出黏性高分子物质，将细胞牢固地黏附在牡体表面上。此后，继续由微生物细胞刂泌一些化合物，逐渐形成微生物膜。 实验方案 2.1实验目的 2.1.1 理解固定化细胞技术的原理方法和意?。 2.1.2 掌握用海藻酸钠制备固定化酵母细胞的方法。 2.1.3 掌握用斐林试剂比色泔测定还原糖的方法。 2.2实骈原理 2.2.1 细胞固定化原理 固定微生物细胞的原理是将微生物细胞利甠物瀆的或化学的方法，使细胞与固体的水不沶性攏持牉（?称载体）癸结合，使?既不溶于水，又胭俜持微生物的活性。它在固相状态作用于底物，具有离子交换?脂那样的特点，有一定的机械强度，可用搅拌或装柱形式与底物溶液接觢。由于微生牡细胞被固定在载体上＄使弗它令在反应结杏后，可反复使用，也可贮存较长时间使微生物活性不变。 细胞固定化的方法按多种，如吸附法、载体偶联法和包埋法等。工业上常用包埋法固定微生物细肞。本次实验采用包埋法对酵母进行固定。 1、包埋法 2、海藻酸钙凝胶囚定酵母细胞.2.2 使用斐林试剂测定还原糖的原理 生物组织中普遍存在的还原糖种类较多．常见的有葡萄糖、果糖、麦芽糖。它们的分子内都含有还原性基团(游离醛基或游离酮基)，因此叫做还原糖。 用斐林试剂能检验生物组织中还原糖存在。斐林试剂由甲液(质量浓度为0.1 g/mL的NaOH溶液)和乙液(质量浓度为0.05 g/mL的CuSO4溶液)配制而成，二者混合后，立即生成淡蓝色的Cu(OH)2沉淀。Cu(OH)2与加入的葡萄糖在加热的条件下，能够生成砖红色的Cu2O沉淀，而葡萄糖本身则氧化成葡萄糖酸。其反应式如下： (沉淀) 。本实验选用固定?酵殍细胞，检测?对葡萄糖的消耗效率。.3实验方案的确定 2.3.1 菌种（酵母菌）的来源 1、 2.3.2 选择的土壤悬液浓度 由于花园中璄土地非常湿润，而且通风?态良好，可以估誡土壤里霢的微生物种类较多，含量也很丰富。所以，为了确保培养得到的微生物菌落不会过密或过于稀疏，在本次实验中，选择了3个土壤悬液浓嚦梯度，分别是：×10-4、×10-5、×10-6。.3.3 筛选酵母菌的培养基（液） 常用于筛选分离土壤中的酵母菌的培养基有：YPD培养基和马铃薯葡萄糖培养基，由于YPD培养基的配置方便，而且也常用于酵母菌的发酵培养，所以本次实验选择用YPD培养基来筛选分离酵母菌。 Y