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生化实验报告2
实验实验目的
二、实验设备及材料
1. 所需试剂
(1)硫酸铜
(2)硫酸钾
(3)浓硫酸
(3)氢氧化钠
(4)硼酸
(5)盐酸
(6)溴甲酚绿
(7)95%乙醇
(8)甲基红
(9)无水碳酸钠
(10)蒸馏水
仪器
1 BUCHI定氮仪(型号)、消化炉(型号)及消化管、消化管架、消化管夹
2 超声波清洗机
3 塑料桶
4 电子天平(0.1mg)
5称样勺
6 烧杯
7 玻璃棒
8 1000ml或2000ml定容瓶
9 电炉
10 酸式滴定管
11 马弗炉
12. 250ml锥形瓶
13. 胶头吸管
14. 棕色小瓶三、实验原理天然有机物(如蛋白质、核酸及氨基酸等)的含氮常用微量凯氏定氮法来测定。
当被测的天然含氮有机物与浓硫酸共热时,分解出氮、二氧化碳及水。氮转变出的氨与硫酸化合生成硫酸铵。分解反应进行得很慢,可加入硫酸铜及硫酸钾或硫酸钠促进之,其中硫酸铜为催化,硫酸钾或硫酸钠可提高消化液的沸点。氧化剂过氧化氢也能加速反应。
消化完了后,在凯氏定氮仪中加入强碱碱化消化液,使硫酸铵分解,放出氨。用水蒸汽蒸馏法,将氮蒸入过量标准无机酸溶液中,然后用标准碱溶液进行滴定,确测定氨量,从而折算出含氮量。
以甘苷酸为例,该过程的化学反应如下:
CH2-COON
│ +3H2S04→2C02+3S02+4H20+NH3
NH2 2NH3十H2S04→(NH4)2SO4 (NH4)2S04+2NaOH→2H2O+Na2SO4+2NH3↑ 测定时常用硼酸溶液收集氨,氨与溶液中的氢离子结合,生成铵离子,使溶液中氢离子浓度降低。然后再用强酸滴定,直至恢复溶液中原来氢离子浓度为止。所用的强酸的当量数即相当于被测样品中氨的当量数。
本法适用的范围为0.2-1.0毫克氮。相对误差应小于±2%。2. 基本试剂配制
(1)催化剂:硫酸铜 0.5g+硫酸钾3.0g/支管;
(2)0.2%溴甲酚绿溶液:95%乙醇溶液作溶剂0.2克溴甲酚绿100ml 95%乙醇(?0.1克50ml)
(3)0.2%甲基红溶液:95%乙醇溶液作溶剂;0.2克甲基红100ml 95%乙醇(?0.1克50ml)
(4)40%氢氧化钠溶液补充给机器自带的桶,不要让管子里有气泡;
(5)0.01mol/l 盐酸滴定液量取9ml盐酸,加适量水并稀释至1000ml。混匀,待标定。3. 实验试剂配制
(1)催化剂:硫酸铜 0.5g+硫酸钾3.0g/支管;
(2)1%硼酸溶液:要盖住,最好2周用完或用桶装;
(3)指示剂:5份0.2%溴甲酚绿-乙醇溶液与1份0.2%甲基红-乙醇溶液混合;酸性显红色,中性显葡萄紫色,碱性显绿色。实验步骤
1. 称样:
称取0.5克干样品于消化管中,每管加入催化剂硫酸铜0.5克和硫酸钾3.0克,再加入10毫升浓硫酸。
2. 消化
机器设定:
3. 蒸馏
机器设定:
锥形瓶中加1%硼酸溶液3滴指示剂,变蓝色4. 滴定盐酸滴定蛋白质测定表格: 时间: 测定人:
编号 样品类型 样品重g HCl用量(ml) HCl浓度(mol/l) 1 空白 2 空白 3 4 . 计算
样品的总氮含量克氮/%=[(A-B)×N×14/m×1000]×100
注:“空白”滴定值包括水及氢氧化钠溶液中含有的微量的氮。因此,水质对“空白”滴定值的影响甚大。“消化样品”最后用“消化空白”进行校正计算,“不消化的样品”最后用“不消化的空白”进行校正计算。而且,在实脸中,稀释样品的水与“空白”的应取自于同一瓶中。
样品中的蛋白质含量克/%=(A-B)×N×14×6.2500×100/m×1000
式中:A:为滴定样品用去的盐酸平均毫升数;B:为滴定空白用去的盐酸平均毫升数;m:为称量样品的克数;实验中使用盐酸的实际浓度;14:为氮的原子量;6.25:为系数1毫升0.1N盐酸相当于0.14毫克氮。
盐酸标准滴定溶液0.1mol/L)的标定(GB/T5009.1-2003)
1)标定:精密称取约0.15g在270~300干燥至恒量的基准无水碳酸钠,加50ml水使之溶解,加10滴溴甲酚绿-甲基红混合指示液,用本溶液滴定至溶液由绿色转变为紫红色,煮沸2min,冷却至室温,继续滴定至溶液由绿色变为暗紫色。
注:用本指示剂,0.01mol/l 盐酸滴定,终点为很淡的粉红色
()计算公式:(HCl)(mol/L)=m/[V1-V20.0530]
注:
m:为称量Na2CO3样品的克数;V1:样品的滴定体积V2:空白管的滴定体积0.0530:是与1.00ml盐酸标准滴定溶液[HCl)=1mol/L]相当的基准无水碳酸钠的质量,g
实验测定
实验目的
. 学习使用比色法测定生物样品中总磷的(
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