选修一生物技术实践含练习版要点分析.doc

选修一《生物技术实践》学习资料 一．微生物的培养和利用 基本概念 培养基：配制出来的供微生物生长繁殖的营养基质。 一般都含有水、碳源（提供碳元素的物质）、氮源（提供氮元素的物质）和无机盐等。 还要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。 分液体培养基、固体培养基等。 选择培养基：允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基。 消毒：指使用较为温和的物理或化学方法，仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物（不 包括芽孢和孢子）。 方法：煮沸消毒法；利用化学药剂消毒，如用酒精擦拭双手、用氯气消毒水源等 灭菌：使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。 灼烧灭菌：如将微生物接种工具在酒精灯上充分燃烧层灼烧 干热灭菌：160~170℃加热1~2h 高压蒸汽灭菌：100 ℃以上，100kPa，15~30min 无菌技术： 1．对实验操作的空间、操作者的衣着和手，进行清洁和消毒； 2．将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌； 3．为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行； 4．实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触。 筛选菌株：人为地提供有利于目的菌株生长的条件（包括营养、温度、pH等），同时抑制或阻止其 他微生物生长。例如：从70~80℃的热泉中筛选出水生耐热细菌Taq 统计菌落数目：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一 个活菌。 一般选择菌落数在30~300的平板进行计数。 （一）微生物的实验室培养 实验目的 1．了解有关培养基的基础知识。 2．学习无菌技术的操作。 3．学习微生物的实验室培养方法。 实验原理 1．微生物能在适宜的温度下，在培养基上传代生长。 2．无菌技术是获得纯净的培养物和防止外来杂菌入侵的关键。 实验仪器与用具 高压灭菌锅、恒温水浴锅、恒温培养箱、超净工作台、酒精灯、浸泡在75%酒精中的涂布器、酒精棉球、接种环、电子天平、称量纸、药匙、量筒、烧杯、培养皿、锥形瓶。 实验材料与试剂 牛肉膏、琼脂粉、NaCl、蛋白胨、大肠杆菌菌种。 方法步骤 ①配制培养基 在电子天平上称量牛肉膏0.5g，将牛肉膏连同称量纸一同放入250mL的锥形瓶中，再依次加入已经称好的蛋白胨1g 、NaCl 0.5g、琼脂粉2 g，最后加入100 mL蒸馏水。将锥形瓶放在水浴锅中加热、搅拌，使上述各种成分溶解，待完全溶解后挑出称量纸。将溶解好的固体培养基加上封口膜备用。如需配制牛肉汤，则无需加入琼脂粉。 ②培养基和实验用具灭菌 在灭菌锅中加入适量的水后，放入包好的培养皿和装有培养基的锥形瓶，之后在121℃、0.1兆帕压力下灭菌20min。冷却后取出锅内物品，放置在超净工作台上。 ③倒平板（培养基） 用酒精棉球擦试超净台和实验者的双手。待锥形瓶内培养基冷却至50℃，点燃酒精灯，在酒精灯的火焰附近打开锥形瓶的封口膜，右手持封口膜和锥形瓶口，左手持培养皿，向培养皿中倒入培养基约20mL，在超净台上轻轻摇匀后冷却，倒置备用。 ④接菌种 取大肠杆菌斜面试管一支，在酒精灯的火焰上灼烧接种环，将接种环放入斜面试管内稍稍冷却，之后用接种环轻刮一圈菌体，将菌体划线接种到固体培养基上。划线时，先在培养皿的一个区域内划线，然后转动培养皿90度，在酒精灯的火焰上将接种环上的余菌杀灭，冷却后再在第一次划线的后端往第二区域内划线，如此重复操作4次。划线时注意不要将培养基划破。总共划3个平板和1个空白对照。 ⑤培养和观察 将上述4个平板放入恒温培养箱内，30℃培养24h。取出平板，可以看到已经分离的单个培养基菌落，而空白培养基上没有任何菌落生长。 微生物接种方法 平板划线法：通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散 到培养基的表面。在数次划线后，可以分离到由一个细菌繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体，这就 是菌落。 稀释涂布平板法：将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固 体培养基的表面，进行培养。在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个的菌落。 （二）土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 实验目的 1．从土壤中分离出能够分解尿素的细菌。 2．统计每克土壤样品中究竟含有多少这样的细菌。 实验原理 1．利用以尿素作为唯一氮源的尿素分解菌选择培养基从土壤中分离尿素分解菌。 2．对土壤样品进行稀释涂布培养，计算每克土壤样品中含有多少利用尿素的分解菌。 实验仪器与用具 高压灭菌锅、恒温培养箱、超净工作台、酒精灯、浸泡在75%酒精中的涂布器、酒精棉球、接种环、电子天平、称量纸、药匙、微量可调移液器与吸头、量筒、烧杯、培养皿、锥形瓶（100 mL 、5