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微生物发酵工程 6无菌保障 6 无菌保障 ; 灭菌:用物理或化学方法杀灭或去除物料或设备中一切生命的过程。 原理:当温度超过最高限度时,微生物细胞中的原生质和酶的基本成分----蛋白质发生不可逆的变化,使微生物在很短时间内死亡。 以能否杀死芽孢细菌为标准。 杀死微生物的极端温度称为致死温度。 在致死温度下,杀死全部微生物所需的时间称为致死时间。 培养基进行湿热灭菌时,培养基中的微生物受热死亡的速率与残存的微生物数量成正比。 即: dN/dt= -kN 式中:N--- 培养基中残留活菌数( 个) t--- 受热时间( min) k--- 反应速率常数或比死亡速率(min-1) 若开始灭菌时(t=0),培养基中微生物的数量为N0, 将上式积分得: lnN/N0=-kt N= N0e-kt ( 对数残留定律) lnN/N0=-kt t = 1/k ln N0/Nt t = 2.303 /k lg N0/Nt 计算时,Nt 一般可取0.001,N0 可参照一般培养基中活微生物数,取(1-2)X107而得。 即: k =Ae -△E/RT 式中: A---频率因子 △ E---杀死微生物所需的活化能 R---气体常数,8.314 J/(mol ·K) Lg k = - 1 △E /2.303 RT +lg A 耐热芽胞杆菌 A 取作1.34X10 36s-1 △E取 2.844X105 J/mol 以Lg k与1/T作图,得一直线,从直线的斜率和截距求得△ E和A。 进而根据灭菌温度可以求出k值, 并计算出灭菌时间。 一般杀灭微生物营养细胞的△ E值约为2.09X105-2.71X105J/mol, 杀死微生物芽孢的△ E值约为4.48X105 J/mol。 因为加热灭菌过程中对培养基的破坏反应的速率常数也符合阿仑尼乌斯定律, 同理计算出了培养基中某营养成分分解的△ E,值。 一般酶和维生素等营养成分分解的△ E,值为8.36X103- 8.36X104。 由于灭菌时杀死微生物的活化能△ E值大于培养基营养成分破坏的活化能△ E,值, 因此随着温度的升高,灭菌速率常数增加的倍数大于培养基中营养成分分解的速率常数的增加倍数。 lnk2/k1 △ E lnk’2/k’1 △ E, 因此较高的灭菌温度, 较短的灭菌时间能减少培养基营养成分的损耗。 1.分批灭菌,不计升温阶段所杀灭的菌数, t = 2.303 /k lg N0/Nt 例1.有一发酵罐内装40m3 培养基, 在121℃温度下进行实罐灭菌。 原污染程度为每1mL 有2X105 个耐热细菌芽孢,121℃ 时灭菌速率常数为1.8min-1 求灭菌失败几率为0.001 时所需要的灭菌时间 解:N0 = 40 X106 X 2 X105 = 8X 1012个 Nt= 0.001个 K = 1.8 min-1 灭菌时间:t = 2.303 /1.8 lg (8X 1012/0.001) = 20.34min 例2.若将例1中的培养基采用连续灭菌,灭菌温度131℃,此温度下灭菌速率为15min-1。求灭菌所需的维持时间。 解:C0=2X105(个/ml) Cs=1/40X106X1000= 2.5X10-11 (个/ml) 灭菌所需的时间 t = 2.303 /15 lg (2X 105/2.5X10-11) = 2.37min 1.分批灭菌:将配制好的培养基放在发酵罐或其他容器中,通入蒸汽将培养基和所有设备仪器灭菌的操作过程,也称实罐灭菌。 将配制好的培养基在高温快速的情况下,向发酵罐输送的同时经过加温,保温,冷却的过程进行灭菌。 6.3 空气过滤除菌 二.空气除菌设备 三.空气净化的流程 1. 空气的预处理 1). 采风塔: ≥10m ,上风头, 流速8m/s. 2). 粗过滤器:前置过滤器, 拦截空气中较大的灰尘以保护空气压缩机,同时减轻总过滤器的负担.过滤介质
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