透射电子显微镜简介要点分析.ppt

L/O/G/O 透射电子显微镜 电镜和电镜技术是进行超微结构研究的主要工具和手段，没有电镜技术就无法进行超微结构研究。 超微结构就是指用电镜技术作为手段去观察光学显微镜所看不到的和看不清的生物结构的细节。 透射电子显微镜（TEM） 概况 1858年 光学显微镜-------细胞水平 1950年 电子显微镜-------亚细胞水平 1985年 原子力显微镜(Atomic Force Microscope , AFM) 扫描隧道显微镜(Scanning Tunneling Microscope , STM) 1990年 AFM商品化问世，对分子、原子水平、 DNA、蛋白质进行形态分析 从LM到SPM的比较 镜的种类 倍 组织细胞物质组成 人 0 器官水平（大体检查） 放大镜 3 器官水平 立体显微镜 50 组织水平（显微外科） 光学显微镜 2-103 细胞水平（病理诊断） 共聚焦显微镜 15-103 活细胞三维成像 扫描电镜 6-104 细胞表面结构 透射电镜 3×105 细胞超微结构（亚细胞水平） 扫描探针显微镜 5×105-106 原子水平 透射电镜外观 结构 （一）照明系统 1.电子枪： 阴极：0.1-0.5nm钨丝，V 型 阳极：带孔的金属圆盘 电位差-10—-120kv 栅极：控制电子束 2.聚光镜（ 1-3个活动光阑）：200、300、400um 控制照明束的强弱 （二）样品室 （三）成像系统：物镜、中间镜、投影镜 （四）观察室、底片室 透射电子显微镜剖面图 （五）真空系统：机械泵（10-2mmHg） 油扩散泵(10-6mmHg) 离子泵（10-7mmHg） （六）电源系统：电子枪：高电压低电流 镜筒：低电压高电流 工作原理 利用电子束轰击样品，可以产生许多电子信号。电镜就是利用这些信号来形成不同的像。 透射电子：是指透过样品的电子，它穿透样品时受到样品内各种元素的原子核的散射，因此它携有样品结构的信息。透射电子显微镜就是运用透射电子成像。 高速电子与样品中原子核发生碰撞，从而发生散射现象。标本厚度、密度、电子束受阻情况不同，透过标本电子束流就有多少的区别，荧光屏上出现明暗不同影像。标本的密度、厚度与电子的散射作用成正比。 标本中电子散射得少，透过的部分就多----标本亮；反之亦然。 电子产生与样品发生的多种作用 入射电子束 二次电子 俄歇电子 背散射电子 特征X射线 散射电子 散射电子 透射电子 样品 TEM样品制备 取材 固定 脱水 浸透、包埋 超薄切片 染色 （一）取材 基本要求： 1.快：动作迅速，一分钟之内投入固定液； 2.小：组织体积要小，不超过1mm3; 3.小：机械损伤要小，刀锋利，免牵拉、挫伤及挤压等； 4.低：低温（0°C-4 °C ）,降低酶活性，防止自溶 （二）固定 目的：使细胞器及大分子结构保持生活状态 形态学的美是良好固定的产物 方法：物理（干燥、冰冻）、化学 五十年代初， OsO4---较满意，目前仍是 五十年代后期，高锰酸钾---植物研究中起突出作用，对大多数生物医学研究不适合 六十年代初期，发现OsO4不适于电镜细胞化学研究，出现醛类固定剂，主要是戊二醛 目前多采用双固定法，即利用戊二醛对组织穿透较快、较深的特点作为OsO4固定的前固定，以达到取长补短的效果 常用固定剂： 1.OsO4 (锇酸) ：不饱和脂肪酸、脂蛋白、 磷脂蛋白。 优：电子染色，图像反差好，膜性结构固定佳 缺：渗透力弱，0.1-0.3mm/小时，小于2小时，否则变脆 2.C5H8O2 (戊二醛)：广泛使用 优：糖原、糖蛋白、微管、内质网、细胞基质， 酶活性保存好，长时间固定不会使组织变脆 缺：对脂肪、膜性结构固定差，没电子染色作用 3.甲醛：分子量小，渗透快，保存酶活性好，多