第八章合子胚培养.doc

第八章 合子胚培养合子胚培养并且，在离体胚培养成功的基础上，又进行了胚乳、胚珠和子房的培养，特别是未受精胚珠或子房培养，为进行离体授粉(或试管受精)的研究提供了重要的技术条件。试管受精技术使克服远缘杂交中花粉与柱头之间的不亲和性成为可能。合子胚培养合子胚培养1904年，Hannig最早在无菌条件下进行了离体胚培养实验，他当时所培养的是两无机盐和蔗糖的半固体培养基上Hannig成功将胚培育成可移栽的幼苗。随后，许多研究者从一些植物的成熟种子，特别是从败育导致种子不能萌发的植物中分离种胚，通过离体培养获得植株。依靠合子胚培养技术，现在已经能够挽救早熟败育的杂志胚了。 2胚培养的类型 离体胚培养可分为幼胚培养和成熟胚培养。离体培养中，这两类胚的成苗途径和所需营养条成熟胚培养(带种皮)用药剂进行表面消幼胚培养 幼胚指的是尚未成熟即发育早期的胚。它较成熟胚难培养这种未经完成正常的胚胎发育过程而形成幼苗的现象(precocious germination)。早熟萌发 3合子胚培养方法材 由于植物类型及实验目的的不同，幼胚培养对材料的要求也不一样。一般的实验或示20～25个胚珠，且基本处于同一发育则须对刚开放的花进行人工授粉 取回大田或温室里70％的酒精进行几秒表面消毒，再用01％氯10-30min，用无菌水冲洗3～4次，即可用于胚的分离和培养。胚的分离及培养 胚的分离一般来说，在进行胚的离体培养时，必须把胚，并且在剥离出灭菌后的材料在无菌条件下切开子房壁，用镊子取出胚珠，剥离珠被，取胚的培养(带种皮)用药剂进行表面消幼胚较成熟胚培养难胚胎发育过程分为两个时期：一为异养期(heterotrophy period)，即幼胚由胚乳及周围的组织提供养分；二为自养期(autotroph period)，此时 在人工培养基上幼龄胚通常很难培养尽管对培养基做了不少改进，胚在30％～40％的杂种未成熟胚1％的成功率。 影响胚培养的因素 培养基无机盐用于胚培养的无机盐配方很多对其中每种成分的作用并无精确成熟胚培养中，主要采用一些较简单的培养基，Tukey、Randolph、White等。幼胚培养的培养基主要有MS、B5、Nitsch、Rijen、White、Rangaswang、Norstog等。Monnier(1976)研究了几种标准的无机盐溶液(包括Knop、Miller、MS等培养基)对荠菜胚培养的作用，发现在一定的培养基上，未成熟胚的生长和存活之间并不）MS培养基中，未成熟胚的生长最好，但存活率却低；在Knop培养基中，虽Monnier通过变动MS培养基中每一种盐分的浓度，配制了一MS培养基相比，这种培养基中K＋和Ca2的水平比较高，而N的水平则低。据Umbeck和Norstog(1979)报道，培养基中的NH对于大麦未成熟胚的正常生长和分化是必需的。当以N03作为无机氮的惟一来源时，500m长的大麦胚在培养中只能略有生长，而这主要是由于细胞伸长造成的。盾片等的分化则需要有43～86 mmo|／L NH的存在。在曼陀罗和紫花曼陀罗中，对未成熟胚的培养来说，NH或是必需的，或是一种较好的无机氮；另一方面，黄麻的胚则绝对需要硝态氮。碳水化合物在离体的成熟胚止，蔗糖被认为是碳水化合物的最好形式，在胚培养中的应用最为广泛。在胚培养基中加入蔗糖不仅是作为一种能源，而且是为了保持适当的渗透压，后者对于未成熟胚的培养来说尤为重要。2％蔗糖的培养基中就能这是因为在自然条件下，原胚被一种高渗液体包围着。8％～12％在长期的培养过程中，随着培养时问的增加，必须把胚转移到蔗糖水平逐步降低的培养基中 另有观点认为，胚在离体条件下的生长和分化在很大程度ABA有效地取代。氨基酸和维生素在胚培养中加入氨基酸，无论是单一的还是复合的，都能刺激胚的生500mg／L的谷氨酰胺可促进多种植物离体胚的培1 600mg／L的谷氨酰胺能强烈促进银杏胚形成的幼苗生长。水解酪蛋白(CH)是一种氨基酸复合物，一直被广泛用于胚培养四季橘很小的球形胚(14～28m×14～28m)的500mg／L毛曼陀罗和曼陀罗的胚在含有400 mg／L CH的培养基上长得最50 mg／L CH能促进紫花曼陀罗胚的生长，但100 mg／L时则有毒害作用。 常用于胚培养的维生素类有硫胺素、吡哆醇、烟酸、泛酸钙等。维生素对发育初期的幼胚培 4.1.4植物生长调节剂Monnier(1978)建议，在胚培养基中不应加入植物激GA3来说已在菜豆上得到了清楚的证明，其中胚柄可以满足离体胚对激。了由胚和胚段诱导愈伤组织，通常都须在培养基中加入生长素或细胞分 在大麦(500 m长)培养中，若加入ABA，特别是当有NH存在的情况下，不GA3和激动素所促成的早熟萌发，而且能使胚循序进行正常的发 4.1.5天然有机