紫外可见分光光度计的应用分析报告.pptVIP

一、紫外可见分光光度计的简单原理： 朗伯定律（1760年）：物质对光的吸收与物质厚度成正比:A=f(b) 比耳定律（1852年）：物质对光的吸收与物质浓度成正比:A=f(c) 朗伯比耳定律：A=εbc；成立条件：①单色光②稀溶液 注：朗伯比耳定律A=εbc, 是一切UV-VISS设计者、制造者、使用者必须严格遵守的最基本、最重要的定律。 1945年UVS问世（1940年开始实验、设计；简单、粗糙、手动）；当前已成为全世界历史最优久、使用最多、覆盖面最广的分析仪器！已成为全世界公认的光、机、电、计算机结合的高科技产品 一般的紫外可见分光光度计都有以下几部分组成：光源；单色器；样品池；检测器等。 应用领域：　 紫外可见分光光度计是一种历史悠久、覆盖面很广、使用很多的分析仪器，已在有机化学、生物化学、药品分析、食品检验、医药卫生、环境保护、生命科学等各个领域的科研、生产工作中都得到了极其广泛的应用。 可以说有实验室的地方就会有它。 二、影响紫外仪器质量的几个重要指标 光度准确度与重复性 定义：多次测量的光度平均值与真值之差为光度准确度（ΔT 、Δ A）；最大值与最小值之差为光度重复性。 测定方法：用标准滤色片或重铬酸钾溶液，进行波长扫描、峰值检出，连续测量三次。 重要性：严重影响测定的准确度，是测定误差的主要来源。见下图：  2 杂散光 定义：单色器额定通带以外的透射辐射能量与总的透射能量之比，也就是光谱通带以外“不要的”光通量就是杂散光。 测定方法：标准滤色片法或NaI(220 nm处)、NaNO2(340nm处)。 主要来源：光栅、光学元件、电光源系统、化学发光、试池荧光、粒子散射等。 重要性：限制测定浓度的上限从而影响分析的准确度。 举例：如对某生物酶检测：它的吸光度为1.95Abs,要求1%误差；仪器的SL=0.2%，行不行？ 不行！因其误差为3.6%！只有SL=0.05%,才可达1%!请见上图！  3 噪声 定义：无样品时仪器自身的波动。 测定方法：开机预热、500nm处时间扫描120秒。 主要来源：光学系统、光源、检测器、电子元器件及电路设计等。 重要性：限制测定浓度的下限，从而影响分析的准确度。 4 稳定性（即漂移） 定义：一小时内仪器自身的漂移量。 重要性：如不好，影响测定的重现性与准确度，严重甚至根本无法测定。 影响稳定性的主要因素： 光源（氘灯：电源1%-光6.7%；钨灯：电源1%-光3.4% ）、 光电倍增管(电源1%-放大后的信号12% )、温度、环境等 5 基线平直度 定义：全波段的噪声、含滤光片和光源切换等。 测试方法：OA、SBW2nm、全波长扫描。 基线平直度与噪声的区别： 基线平直度：全波段扫描、动态；与狭缝、光源切换有关。 噪声：单波长500nm、静态 时间扫描；与狭缝、光源切换无关。 基线平直度与稳定性的区别： 基线平直度：0A, SBW2nm、开机半小时后，全波长慢（中）速扫描 稳定性：0A, SBW2nm，定波长500nm。开机两小时后 时间扫描( 1h ) 6 波长准确度与重复性 波长准确度：多次测量平均值与真值之差。 波长重复性：多次测量值中最大最小值之差。 测定方法：用汞灯（871.60、546.07nm、253.65nm)、氘灯(656.1nm、486.0nm)或者用标准滤色片。 重要性：吸光度是随波长而变化的，波长准确度不合格，测量的吸光度肯定也不准确。 三、TU-1901/1900介绍 1、性能指标（与国外同档次仪器的比较） 2、功能指标： 光度测量： 测量样品在指 定波长下的吸 光度或透过率。 可进行单波长 或多波长测量  并可对测 量值进行 简单的计 算。 光谱扫描： 测量样品在指定 的波长范围内吸 光度或透过率随 波长变化的曲线 可对扫描参数进 行任意设置。 多文件管理；同时可实现对图谱进行峰值检出、四则运算、A-T转换、1—4次导数、三维图谱等多种功能。 定量测定： 基于工作曲线， 而对样品浓度 进行定量测定 的相对测量法。 具有单波长、 双波长、三 波长、1—4 次导数等多 种测量方法。 可对校正曲线 （工作曲线） 自动进行1—4次 的曲线拟合，并 自动计算出未知 样品的浓度。 时间扫描： 测量样品在指 定波长下吸光 度随时间变化 的曲线。 常用于研究化 学反应历程、 化学动力学等。 举例：显色反应中有色物质的稳定性。 DNA/蛋白质检测器： 测量DNA/蛋白质的浓度。 提供三种方法，快速测量DNA/蛋白质的 浓度。