选3-1-2-基因结构、基因工程步骤要点分析.pptVIP

（3）将目的基因导入微生物细胞： ①微生物作受体细胞原因： ②常用菌： ③常用法： ④转化过程： 大肠杆菌 Ca2+处理 繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对少 Ca2+处理大肠杆菌 感受态细胞 目的基因的获取 基因表达载体的构建 将目的基因导入受体细胞 目的基因的检测与鉴定 1.2 基因工程的基本操作程序 1.检测 ①检测转基因生物染色体的DNA 上是否插入了目的基因（导入检测） ——DNA分子杂交技术 四、目的基因的检测与鉴定 1.检测 ①检测目的基因 ——DNA分子杂交技术 ②检测目的基因是否转录出了mRNA ——分子杂交技术 ③检测目的基因是否翻译成蛋白质 （表达检测）——抗原-抗体杂交 2.鉴定（个体水平） 抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等 四、目的基因的检测与鉴定 * * 通过复制（DNA复制） ——传递遗传信息 通过转录、翻译控制蛋白质合成 ——表达遗传信息 一、原核细胞的基因结构 DNA 有遗传效应的DNA片段——基因 编码区 非编码区 非编码区 编码区上游 编码区下游 调控遗传信息的表达 (调控序列) 编码蛋白质 (编码序列) 编码区:能转录为相应的信使RNA， 进而指导蛋白质的合成， 即能编码蛋白质的区段 非编码区:不能转录为相应的信使 RNA，更不能指导蛋白质 的合成，即不能编码蛋白 质的区段， 调控遗传信息的表达 非编码区 非编码区 编码区 与RNA聚合酶结合位点 一、原核细胞的基因结构 RNA聚合酶 能催化DNA转录为RNA 一种蛋白质，能识别调控序列中的结合位点并与其结合 转录开始后，RNA聚合酶沿DNA分子移动，并与DNA分子的一条链为模板合成RNA。 转录完毕后，RNA链释放出来，紧接着RNA聚合酶也从DNA模板链上脱落下来。 RNA 聚合酶 A G G T C A C G T C G T C C A G T G C A G C 一、原核细胞的基因结构 与RNA聚合酶结合位点 A G G U C A C G U C G 编码区 非编码区 非编码区 编码区下游 外显子 二、真核细胞的基因结构 编码区上游 与RNA聚合酶结合位点 内含子 调控遗传信息的表达 能编码蛋白质的序列 不能编码蛋白质的序列 编码区 非编码区 外显子 内含子 非 编码序列 特点： 编码区 间隔、 不连续 原核细胞 真核细胞 不同点 相同点 原核细胞与真核细胞的基因结构比较： 非编码区 非编码区 编码区 都由能够编码蛋白质的编码区和具有调控作用的非编码区组成 编码区是连续的 编码区是间隔的，不连续的 RNA 聚合酶 RNA 聚合酶 外显子 内含子 目的基因的获取 基因表达载体的构建 将目的基因导入受体细胞 目的基因的检测与鉴定 1.2 基因工程的基本操作程序 1.2 基因工程的基本操作程序 一、目的基因的获取 获取目的基因的常用方法： （一）从基因文库中获取 （二）利用PCR技术扩增 （三）人工合成 （一）从基因文库中获得目的基因 （获取）未知核苷酸序列的目的基因 1.基因文库 将含有某种生物不同基因的许多DNA片断，导入到受体菌的群体中，各个受体菌分别含有这种生物的不同基因，称为基因文库（gene library） 1.2 基因工程的基本操作程序 一、目的基因的获取 （一）从基因文库中获得目的基因 1.基因文库 ①基因组文库: 基因文库中包含了一种生物所有 的基因。 ②部分基因文库（如 cDNA文库）: 基因文库中包含了一种生物的一 部分基因。 基因组文库 与 部分基因文库 的关系 ⑴直接分离法 提取供体细胞全部DNA 许多DNA片段 不同受体菌群 该生物基因组文库 （基因文库中包含了一种生物所有的基因） 限制酶 载体 （一）从基因文库中获得目的基因 2.获取方法 （鸟枪法） （一）从基因文库中获得目的基因 2.获取方法 (2) 反转录法 用某种生物发育的某个时期的mRNA 反转录产生的多种互补DNA（cDNA）片段，在酶的作用下合成双链DNA，与载体连接后储存在一个受体菌群中，则此受体菌群体构成这种生物的——cDNA文库。 部分基因文库的一种 1. 基因组文库： 将某种生物体内的DNA全部提取出来，用适当限制酶，将DNA切成一定大小的DNA片段， 再将这些DNA片段分别与载体连接起来，导入受体菌的群体中储存， 每个受体菌都含有了一段不同的DNA片段。这个群体包含了这种生物的所有基因，叫做这种生物的基因组文库 2. cDNA文库 用某种生物发育某个时期的mRNA反转