第3章多聚核苷酸与核酸2版要点分析.ppt

第 六 章多聚核苷酸和核酸Polynucleotides and Nucleic Acids 第一节 多聚核苷酸 Polynucleotides 二、多聚核苷酸细胞内合成： （四）某些DNA 具有更复杂的螺旋结构 H-DNA的结构 2．4条多聚鸟嘌呤核苷酸链形成四螺旋DNA （三）真核生物DNA与组蛋白组成高度有序的染色体 （一）核小体(nucleosome) 是染色质的基本组成单位， 由DNA和蛋白质构成 。 三、DNA是生物遗传信息的载体 （一） tRNA分子含有较多稀有碱基 74~95个核苷酸组成， 含 10~20% 稀有碱基，如 DHU 具有 T?C (?:假尿嘧啶核苷) 3′末端为 — CCA-OH 5′末端大多数为G 近几年生命科学研究的热点，2001-2003年Science杂志连续将siRNA、miRNA、RNA干扰方面的研究评为十大科技突破。 siRNA和miRNA调控基因表达，影响细胞的许多功能，使人们重新认识RNA分子在细胞进化和功能作用的地位以及广泛的应用前景。 （三）核酸溶液有高分子性质 粘度 ：DNA RNA、 dsDNA ssDNA 粘度大，易断裂。 沉降系数： 不同空间结构，沉降速率不同； 线性 环状 超螺旋的DNA； 超速离心分离。 （四）核酸有紫外线吸收的特性 核酸的紫外吸收：OD260 单核苷酸 ssDNA（或RNA） dsDNA 纯蒸馏水中的DNA在室温下就会变性,为什么 每一个核苷酸的磷酸基上都带有一个负电荷。如果这些负电荷没有被中和，双链之间的这种强有力的静电排斥作用将驱使两条链分开(在同一条链内虽然也存在着这种静电斥力，但由于链内的共价键，这种静电斥力并不重要)。但是当有盐类加入时，这些带负电荷的磷酸基团可以被正离子(如Na+)所中和，也就是正离子围绕在磷酸基周围形成了“离子云”，有效地屏蔽了磷酸基之间的静电斥力。这就是Debye-Hvckel 离子屏蔽理论。在生理盐浓度(约0.2mol／L)时就发生了这种屏蔽作用．斥力也被中止。当离子浓度降低时，这种屏蔽作用减弱，斥力增大，因而Tm值随之降低。事实上．纯蒸馏水中的DNA在室温下就会变性，也就是这个缘故。在超过生理盐浓度时，Tm值仍然随着离子强度的增加而上升，这是因为在高盐浓度下碱基的溶解性降低而增加了疏水作用力，促进了双螺旋结构的稳定。 事实上，平时制备的DNA也总是DNA的钠盐，每个磷酸基总是结合一个Na+在用Nacl和CsCl测量DNA分子量时，就会得到不同的数值，二者之比为0.75。因为单核苷酸的平均分子量为330，若是钠盐则为353，若是铯盐则为467。353／467＝0.75。这就是一个有力的证据。 （四）核酸分子杂交 核酸分子杂交（hybridyzation）： 不同来源，但具互补序列的核酸，按碱基配对原则形成杂化双链的过程。 杂化双链：DNA与DNA分子， DNA与RNA分子， RNA与RNA分子间形成。 第 五 节核 酸 酶 Nucleases  （二）按对底物作用方式不同分类 核酸内切酶：限制性核酸内切酶 非特异性限制性核酸内切酶。 产物：3’OH核酸与5’磷酸核酸 3’磷酸核酸与5’ 核酸 核酸外切酶：5?→3?或3?→5?核酸外切酶。 （三）按对底物二级结构的专一性分类 双链酶：作用于双链核酸 单链酶：作用于单链核酸 二、核糖核酸酶：RNA内切酶 （一）胰核糖核酸酶(RNase1): 作用点：嘧啶核苷酸，产物：3’嘧啶核苷酸 RNase1保护实验：转录调控的研究。 （二）RNaseT1: 识别鸟嘌呤核苷酸，产物3’鸟苷酸 （三）RNaseT2: 识别腺嘌呤核苷酸，产物3’腺苷酸 三、脱氧核糖核酸酶：DNA消化酶 （一）胰DNaseⅠ：切割单链/双链，产物DNA是5?-磷酸末端的寡聚核苷酸 （二）脾DNase Ⅱ：产物是3?-磷酸末端的寡聚核苷酸 （三）BAL 31 核酸酶：DNA3’外切酶活性为主。 （四）限制性内切核酸酶：具有位点特异性。 四、N-糖苷酶可移去碱基　 N-糖苷酶（glycosidase）： 水解核苷酸的N-糖苷键，切除核苷酸的碱基。 有碱基特异性或非特异性的糖苷酶。 目的和要求 掌握：核酸的组成与一级结构； DNA双螺旋结构模型特点；