17-DNA重组技术摘要.pptVIP

第十七章 重组DNA技术与基因组学 DNA测序的基本策略 DNA测序的基本策略 双脱氧末端终止法测序原理 双脱氧末端终止法（Sanger测序法） DNA的测序仪示意图 DNA的化学测序示意图 测序技术进展同位素标记到荧光标记,平板电泳到毛细管电泳 引物标记法测序(Dye Primer) 终止法测序(Dye Terminator) 第二节 重组DNA技术的基本操作原理 一、重组DNA的重要的工具酶 常用的DNA限制性内切酶的专一性 连接酶连接切口 反转录酶的三种催化功能 重组DNA技术基本操作原理 目的基因的获取 基因文库(DNA library) 基因文库和cDNA文库的建立 DNA克隆的载体 重组DNA转移技术 电穿孔法示意图 pBR322质粒的结构 ?噬菌体感染大肠杆菌的途径 ?噬菌体突变型作为克隆载体 反转录病毒的生活周期 鱆鱼碱Ti质粒结构 筛选克隆细胞 pBR322质粒结构 原位杂交法筛选DNA重组体图解 重组DNA表达产物的免疫学检测 Southern和Western印迹法 第三节 重组DNA技术的应用 胰岛素原的人工合成 Ti质粒为载体的植物基因工程 Southern印迹法在DNA指纹法中的应用 Southern印迹法 第四节 基因组学与蛋白质组学及研究技术简介 基因组文库提供基因组特异的遗传信息目录 多聚酶链式反应扩增特异性的DNA片段 PCR技术原理示意图 PCR技术的发展与应用 基因组测序提供最完善的基因文库 人类基因组各种顺序组成图 序列和结构相关性提供蛋白质功能的信息 蛋白质技术和核酸技术的相互增强 DNA芯片技术简介 DVA芯片工作示意图 DNA frangment Electrophoresis Transfer of DNA by blotting 32P-labled DNA probe Autoradiography Agarrose gel Autoradiogram Nitrocellulose sheet Autoradiogram Polymer sheet SDS-Polyacrylamide gel Transfer protein Add radiolabled spesfic antibody , Wash to remove unboud antibody Protein band detected by specific antibody Autoradiography 一、产生新品种新选择 ?转基因动植物 ?构建微生物工程菌 ?基因药物 二、法医学的强大武器—DNA指纹法 三、基因诊断和治疗 胰脏 (A)n 胰岛素原mRNA cDNA 重组质粒 转化细菌 mRNA 反转录酶 胰岛素原基因 与质粒连接 转化E.coli 胰岛素原 I 二元载体系统 II 共整合载体 III T-DNA的转移与整合 Ti辅助质粒 Ti辅助DNA给体质粒 Ti辅助DNA给体质粒 pBR型质粒（给体质粒） 宿主特异性 外源基因 宿主特异性 整合 带有外源基因的Ti质粒 植物DNA Ti质粒转移并插入植物DNA 1 DNA分子量标准物 2 犯罪嫌疑人1 3 现场证据 4 犯罪嫌疑人2 1 2 3 4 Southern印迹法图谱 DNA分子 限制片段 限制性酶切割 琼脂糖电泳 转移至硝酸纤维素膜上 与放射性标记DNA探针杂交 放射自显影 带有DNA片段的凝胶 凝胶 滤膜 用缓冲液转移DNA 吸附有DNA片段的膜 携带有细胞或生物机体的一整套遗传指令的核酸量称为基因组(genome)，在此基础上产生的基因组学(genomics)是一门在整个细胞、整个物种的基因水平研究DNA顺序、整个基因组成分和功能的科学。由一个基因组表达的所有蛋白质成分叫做蛋白质组（proteome），从整体水平研究蛋白质组的结构和功能即为蛋白质组学(proteomics)。 一、基因组文库提供基因组特异的遗传信息目录 二、多聚酶链式反应扩增特异性的DNA片段 三、基因组测序提供最完善的基因文库 四、序列和结构相关性提供蛋白质功能的信息 ?DNA文库是是许多DNA克隆的集合，理论上基因组的所有DNA序列都能存在于基因组文库中。使用分子杂交的方法，可以在文库中找到先前已知的基因或顺序的位置，亦可用生物信息学（Bioinformatics）方法找出基因并研究其功能。 ?在基因组文库中的已知顺序(称为标签顺序位点，sequence-tagged site,STS)能够为基因组测序提供界标。 人类基因组工程以及对各种基因组测