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DNA复制 一、基因组 DNA、RNA与蛋白质 DNA 两条互补链。由 ATCG 4 个碱基形成的字符串。 RNA 单链结构。由 AUCG 4 个碱基形成的字符串。 蛋白质 一条或多条肽链。每个肽链是由 20 种氨基酸 形成的长链，即 20 个字母形成的字符串。 翻译 每 3 个碱基翻译成一个氨基酸。 DNA上的基因 一、核酸的概念和重要性 核酸的概念 核酸是酸性的大分子物质，在活细胞中与碱性蛋白结合，以核蛋白形式存在。 核酸分为脱氧核糖核酸 ( DNA )、核糖核酸 (RNA)两类，DNA所含核苷酸分子数比RNA大得多。 DNA为线性、双螺旋分子或闭合环状分子。 RNA分为三个类型，即核蛋白体 RNA(rRNA，占总RNA80%)、信使RNA(mRNA，占总RNA5%)和转移RNA(tRNA，占总RNA15%)。 脱氧核糖核酸和核糖核酸异同的对比 DNA是遗传的物质基础，负责遗传信息的贮存和发布，遗传基因就是DNA链上的若干核苷酸所组成的片段。 RNA负责遗传信息的表达，直接参与蛋白质生物合成，转录DNA所发布的遗传信息，并将之翻译给蛋白质，使生命机体的生长、发育、繁殖和遗传得以继续进行。 核酸类物质RNA的重要功能 二、核酸的化学组成及其基本结构单位核苷酸 元素组成：C、H、O、N、P P 元素的含量较多并且恒定，约占9～11%。因此可通过定磷法测定核酸含量。 碱基(嘌呤或嘧啶)、戊糖(核糖或脱氧核糖) 和磷酸是核酸（DNA、RNA）的基本构件分子。 核苷酸是核酸的基本组成单位。 2、戊 糖 核苷酸衍生物 核酸的一级结构是核酸中各核苷酸通过 3′,5′磷酸二酯键连接而成的无分支的多 核苷酸链。即核苷酸排列顺序。 DNA的三级结构是指DNA双螺旋结构通过进一步扭 曲和折叠所形成的更加复杂的构象,超螺旋是三级结构 的主要形式。 环状DNA主要有以下三种构象 回文结构与镜像结构 回文结构中的单链可形成发夹结构 双链回文结构可形成十字架结构 信使RNA的结构与功能 原核细胞mRNA的结构特点 真核细胞mRNA的结构特点 Sanger双脱氧链终止法测序反应的种类 灵敏可靠的近红外检测技术 同时分析电泳图和曲线图 TILLING技术的最佳选择 针对微卫星分析的全自动的 SAGAGT 基因型分析系统 完全的AFLP解决方案 读序片段长且准确率高 读序长 800~1200bp(66cm),700~900bp(41cm) 准确率高 900-1100bp≥99% 双向测序 快速、每反应≥2000 bases、反应产物直接上样、准确、经济 核酸的分离提取和纯化 一、寻找基因 1.根据开放读码框预测基因 1.1 起始密码子—ATG 第一个ATG的确定则依据Kozak规则。 Kozak规则是基于已知数据的统计结果，即第一个ATG侧翼序列的碱基分布所满足的统计规律。 若将第一个ATG中的碱基A,T,G分别标为1,2,3位，则Kozak规则可描述如下： 第4位的偏好碱基为G； ATG的5′端约15bp范围的侧翼序列内不含碱基T； 在-3,-6和-9位置，G是偏好碱基； 除-3,-6和-9位，在整个侧翼序列区，C是偏好碱基。 5-pGCTACGTA-3 5-p32GCTACGTA-3 5-p32GCTACGT-3 5-p32GCT-3 5-p32GCTAC-3 5-p32GCTA-3 5-p32G-3 5-p32GCTACG-3 5-p32GC-3 在A切断: 在G切断: 在C切断: 在T切断: 化学裂解: 同位素标记: A G C T 直接读到的碱基顺序是: 5-p32CTACGTA-3 三、杂交法 （Sequencing by hybridization ,SBH ） 用特定长度的具有所有可能碱基序列的寡核苷酸探针与未知序列的DNA片段杂交。根据某些探针形成的完全双链，推知目的DNA的碱基序列。 四、DNA芯片测序 将各种排列顺序的寡核苷酸点播在芯片上，每个点播的寡核苷酸在排列的方阵中都有指定的位置。待检测的DNA分子与芯片温浴，凡是能杂交的寡核苷酸都会在确定位置发出信号，然后根据获取的信息将寡核苷酸的顺序进行对比组装，拼接成完全的DNA顺序。 四、自动化测序 与链终止法测序原理相同，只是用不同的荧光色彩标记ddNTP，如ddATP标记红色荧光，ddCTP标记蓝色荧光，ddGTP标记黄色荧光，ddTTP标记绿色荧光。由于每种ddNTP带有各自特定的荧光颜色，而简化为由1个泳道同时判读4种碱基。 DNA测序步骤与自动化 1）模板制备 可自动化 2）定序反应 可自动化 3）凝胶电泳 自动