基因治疗44资料.ppt

* * * * * * * * * * * * * * *  2.寻找并且人工合成相应的抗原多肽激活淋巴细胞 已经应用的抗原肽包括： 白血病 HLA相关肽： BCR/ABL，PML/RARa ，NPM1； 次要组织相容抗原肽 ACC1 HA1； 病毒抗原混合肽： CMV， EBV。 我们在不同B淋巴瘤亚基因家族的IgHV编码基因上找到了12个高亲和力的抗原９肽。 用抗原9肽刺激的CTL输注给接种淋巴瘤的小鼠，CTL可以特异性识别和杀灭表达同样IgHV亚家族淋巴瘤。 （Liu H, Cai P, Liu HX, Wang JL, Liu Q, Zhu P. Vaccination with immunoglobulin frame region-derived nonapeptide elicits cellular immune response against lymphoma in human leukocyte antigen-A2.1 transgenic mice. Leuk Lymphoma. 2011 Sep;52(9):1795-802.） 用这些抗原9肽刺激获得的CTL输注给接种淋巴瘤的小鼠，CTL可以特异性识别和杀灭表达同样IgHV亚家族淋巴瘤。 鼠脾脏细胞Elispot结果 实验组 PBS+BSA组 PBS组 （Liu Hui et al. Leuk Lymphoma. 2011 Sep;52(9):1795-802.） Pentamer test 判断特异性淋巴细胞的数量 确定抗肿瘤淋巴细胞克隆，用基因扫描方式分析了T细胞克隆的TCR特征，克隆TCR片段，组装完整的TCR在淋巴细胞表面表达，大量扩增改造的淋巴细胞输注给患者。 3. 转TCR基因改造淋巴细胞做免疫治疗 TCR转基因改造方法： T细胞受体基因扫描（gene scan)和T细胞受体基因谱型图（Spectrotyping) 抗TCR BV的单克隆抗体分离淋巴细胞（FACS） HLA/epitope/Pentamer (tetramer) T细胞γ-干扰素分泌水平（ELISpot） T细胞杀伤功能（FATAL） FR1 CDR1 FR3 FR2 CDR3 CDR2 DJC 正常人T细胞受体β链可变区(TCRBV)24家族克隆分布 TCRBV 24基因家族 流式细胞分析TCR24家族 流式细胞术寻找杀伤细胞克隆 确定单克隆T淋巴细胞 我们获得一个白血病病例T细胞优势克隆的1条关键的TCRBV序列和3条TCRAV序列 患者优势T细胞克隆为TCR BV13.1 优势T细胞克隆得到TCR A 1, TCR A 10和TCR A 24 3个序列, 转染淋巴细胞后组成了改造淋巴细胞表面的TCRαβ 2聚体。 TCRAV1家族测序图 TCRAV10家族测序图 TCRAV24家族测序图 将患者疾病相关T细胞克隆的TCRαβ序列克隆到基因载体。 用电转移法转染正常T细胞和Jurkat细胞,培养并扩增。 获得能够识别肿瘤特异性抗原肽的转基因CTL细胞。  转TCR基因淋巴细胞 转T细胞受体基因改造的一例移植后白血病体内供者的淋巴细胞（Xing Hai-zhou et al. Clin. Lab. 2014;60） Clin. Lab. 2014;60 ORIGINAL ARTICLE Donor Lymphocytes may Acquire Cytolytic Specificity to Donor’s Engrafted Hematopoietic Cells after a Hematopoietic Stem Cell Allograft Resulting in Marrow Failure HAIZHOU XING, YUAN OU, JING LIU, PING ZHU Department of Hematology, Peking University First Hospital, Beijing 100034, China 我们希望获得抗急性白血病细胞的细胞毒T细胞，结果却证实： 供者淋巴细胞在移植给患者后，由于患者体内造血微环境诱导，供者淋巴细胞开始攻击移植后供者的造血细胞，导致骨髓衰竭。 4. 嵌合抗原受体基因修饰T淋巴细胞（ CARs T）治疗淋巴细胞白血病 嵌合抗原受体T细胞（chimeric antigen receptor T ce