基因工程第三章基因工程载体解读.ppt

部分抗菌素缩写 氨苄青霉素 Amp, Ap, Amplicilin 四环素 Tet, Tc, Tetracycline 氯霉素 Cml, Cam， Chlorampenicol 链霉素 Str, Sm, Streptomycin 卡那霉素 Kan, Km, Kanamycin 新霉素 Neo, Neomycin 潮霉素 Hyg, Hmb, Hygromycin 质粒的不亲和性（不相容性）是指在没有选择压力的情况下，两种亲缘关系密切的不同质粒，不能在同一寄主细胞内稳定共存的现象。 作为受体的细胞最好不含内源质粒。 p , plasmid 2个大写字母，发现者或试验室名称 数字，序号或试验编号 pBR322 1977, Bolivar Rodriguez pUC系列 1987, J.Messing J. Vieria university of california 本章目标 思考题 1.名词解释：载体、克隆载体、表达载体、质粒、质粒的不相容性、噬菌体载体、粘粒（COS质粒）、人工染色体 2.克隆载体需要满足的基本条件都有哪些？ 3.质粒的特性都有哪些？ 4.柯斯质粒的组成要素都有哪些？ 5.表达载体需要的基本原件有哪些？ 6.比较各类载体的优缺点都有哪些？理想载体是怎样的？怎样设计载体。 7.质粒蓝白斑筛选的原理是什么？ 外源的重组?DNA载体被诱发与内源性原?DNA发生重组。 （3）体外包装存在的问题： ① 包装错误： 既能包装用于生产头部蛋白的内源性原?DNA，也能包装重组的?DNA载体。 ② 重组： ③ 体外包装的容量限制： 必须在正常野生型容量的75%—105% （36—51kb）之间。 既不能超过正常野生型容量的5%； 又不能低于正常野生型容量的75% 野生型?DNA的必须区是28kb，所以?载体的最大克隆容量是23kb。（实际上为15kb）。 比一般的质粒载体的容量大的多。 （4）?DNA载体的优点 用在真核生物基因组文库的建立。 Sau3A BamHI 噬菌体感染细菌形成的噬菌斑 1978年J. Collins和B. Hohn等人发展出cosmid vector（cos site-carrying plasmid) ? DNA： 4—6kb （1）大小 （2）组成 cos序列和控制包装的的序列。 pBR322： 质粒的复制子 抗药性基因 几个限制性酶的单一位点 第三节 cosmid载体（粘粒） pHC79 ①具有?噬菌体的特性： （3）cosmid vector的特点 克隆外源DNA后可以体外包装成噬菌体颗粒。 在寄主细胞内形成环化DNA（但不能形成新的噬菌体颗粒而溶菌 ）。 ②具有质粒载体的特性： 大多带有pMB1或ColE1的复制子，能象质粒一样复制。 有抗菌素抗性基因，和插入失活的克隆位点。 ③方便的选择： ④高容量的克隆能力： 45kb （最少不能低于30kb）。 51kb-6kb=45kb （4）部分cosmid vector pJC720 pJC74m pJC75-58 pJC74 pHS262 pHC79 c2XB Cosmid 载体 克隆能力（kb) 克隆位点 选择标记 大小（kb) 复制子 11~28 HindIII, XmaI Elimm, Rifr 7.1 ColE1 16~32 BamHI Ampr, Kanr 21 ColE1 16~42 EcoRI, BamHI, BglII Ampr 11.4 ColE1 21~37 EcoRI, BamHI, BglII, SalI Ampr 15.8 ColE1 34~50 BamHI, EcoRI, HincII Kanr 2.8 ColE1 29~46 EcoRI, HindIII, SalI, BamHI, PstI, CalI Ampr , Tetr 6.4 pMB1 32~45 BamHI, ClaI, EcoRI, HindIII, PstI, SmaI Ampr, Kanr 6.8 pMB1 M13 RF BsuI不完全消化 各种长度的线性片断 （其中应有只在IG上切开的线性全长M13） E.coli lac基因的HindII片断(lacI、lacP、lacO、lacZ’） 连接 M13mp1 JM101宿主 只有在IG区插入lacZ’才能存活并在Xgal上出现互补的蓝噬菌斑 （3）M13载体系列 加上常用的酶切位点。 ① M13载体系列的命名 M13mpn n代表系列数字 ② 对M13mp1的改进 B. Gronenborn和J.