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* 三9班 * a * * 三、细胞工程 细胞工程 植物细 胞工程 动物细 胞工程 理论基础： 技术手段 植物组织培养 植物体细胞杂交 技术手段 动物细胞培养 动物细胞融合 细胞核移植 胚胎移植等 理论基础: 过程 应用 植物细胞的全能性 细胞增殖 （一）植物组织培养 离体的器官、 组织或细胞 （外植体） 愈伤组织 根、芽 植物体 脱分化 再分化 条件 环境条件 营养条件 诱导条件 特点 应用 原理 诱导条件 应用 植物细胞全能性！！！ （1）离体是必须条件 脱分化：（指外植体通过 形成愈伤组织的过程） （3）营养条件： 碳源（往往是 ） 氮源（铵盐、硝酸盐） 矿质元素、维生素、有机添加物、水等 （4）环境条件： 适宜的温度、PH值等 （5）操作中的注意事项——无菌条件 （2）诱导条件——植物激素： 当细胞分裂素和生长素共同使用时， 能强烈地刺激愈伤组织的形成 蔗糖 细胞分裂 2、愈伤组织 （2）应用：生产药物、食品添加剂等 3、再分化：诱导条件—— 细胞分裂素与生长素含量的相对比例 （1）特点： 应用——人工种子 思考：在人工种子中应该包含的结构是什么？ 人工种皮应该具有哪些特点才能够应用于实践中？ 排列疏松、无规则、高度液泡化、无定形状态 的一团薄壁细胞——未分化，具有全能性！！！ 比例高——发芽，比例低——生根 （透水、透气、透光，易于降解） 如果快速繁殖无病毒植株，培养终点？？？ 取材应为？？？ 植物体 茎尖和根尖组织 （是否需要光照？） 二、动物细胞培养 动物胚胎或幼龄动物 的组织、器官 细胞悬浮液 胰蛋白酶 10代细胞 原代培养 50代细胞 无限传代 传代培养 (传代细胞) 原理？？？ 细胞的增殖 2、营养条件： 3、环境条件： 4、培养条件—— 为什么不使用蔗糖？ 碳源——葡萄糖 氮源——氨基酸 是否与植物培养相同？ 无机盐 能否被称为矿质元素？ 1、必须条件——离体 生长因子——维生素 水 动物血清？？ ——模拟内环境 提供营养、激素 适宜的温度、PH等 5、操作中的注意事项——无菌条件 动物细胞培养的应用 作为研究动物细胞的材料----Hela细胞系(1952) 研究有毒物质的毒性 生产各类蛋白质制品：干扰素、单抗 细胞、组织移植（烧伤病人植皮）等 动物细胞培养与植物组织培养的比较 植物组织培养 动物细胞培养 原理 植物细胞全能性 动物细胞的增殖 培养基 固体；蔗糖等营养物质、植物激素等 液体；葡萄糖等营养物质、动物血清等 结果 培养成植株 培育成细胞株、系 应用 快速繁殖、培育无病毒植株等 获得细胞产物或细胞 条件 离体、无菌、适宜的温度、PH、光照等 离体、无菌、适宜的温度、PH等 （三）克隆技术 无性繁殖 分子水平克隆：PCR技术 细胞水平克隆：动物细胞培养（单克隆抗体） 个体水平克隆：克隆羊多利 卵细胞 Ａ母绵羊 Ｂ母绵羊 乳腺细胞 细胞质 细胞核 细胞核移植 早期胚胎 卵裂 C母绵羊子宫 胚胎移植 多莉羊 分娩 妊娠 多莉羊的培育过程 融合后的细胞 解决某些妊娠时间长、每胎产子数少的优良种畜的繁殖速度问题。 （四）植物体细胞杂交 (1)分离原生质体---酶解法 (2)原生质体融合---物、化法 (3)新细胞壁形成 (4)植物组织培养---植物体细胞杂交的技术环节之一 细胞融合技术 (1) (1) (2) (3) (4) (5) 植物体细胞杂交过程 起止点？ 依据的原理？ ——细胞膜的流动性！！！ 去壁 促融 再生壁 杂 种 细 胞 组 培 白菜 甘蓝 白菜－甘蓝 植物体细胞杂交 应用： 植物体细胞杂交意义？ 尚未解决的问题？ 与有性杂交的异同点 克服远源杂交不亲和的障碍，培育种间 或属间杂种，扩展可用于杂交的亲本范 围 （五）动物细胞融合 如人—鼠细胞融合： 1、原理： 细胞膜的流动性 2、过程： 膜融合——质融合——核融合 3、诱导方法： 物理法——离心、振动、电刺激等 化学法——聚乙二醇（PEG） 生物法——灭活的病毒 失去感染活性 保留融合活性 4、应用：制备单克隆抗体 植物体细胞杂交 动物细胞融合 原理 细胞膜的流动性 细胞膜的流动性 融合方法 去细胞壁后诱导 原生质体融合 细胞分散后诱导 细胞融合 诱导手段 物理法、化学法 物理法、化学法、生物法 用途 培育种间或属间杂种植物 制备单克隆抗体 小结 -----动物细胞融合和细胞培养技术的重要用途 （六）单克隆抗体技术 效应B淋巴细胞：具有分泌特异性抗体的能力但不能无限增