植物转基因及其安全性题库2009.docVIP

《植物转基因及其安全性》试题库 一、名词解释 1、PCR：多聚酶链式反应，用于体外扩增DNA片段。 2、分子克隆工具酶：基因工程技术中能用于DNA和RNA 的合成、切割、连接和修饰的各种酶。 3、基因沉默：基因沉默是指转基因植物和转基因动物中，外源基因存在于生物体内，并未丢失或损伤，但该基因不表达或表达量极低的现象。? 4、限制性核酸内切酶：是一类能识别双链DNA中特殊核苷酸序列, 并在合适的反应条件下使每条链一定位点上的磷酸二酯键断开，产生具有3’-OH基团和5’-磷酸基团的DNA片段的内切脱氧核糖核酸酶。 5、受体细胞：受体细胞也叫宿主细胞。受体细胞有原核受体细胞(最主要是大肠杆菌)、真核受体细胞(最主要是酵母菌)、动物细胞和昆虫细胞(其实也是真核受体细胞)。在分子杂交中用来检测互补序列的带有标记的单链DNA或RNA片段。用基因工程技术导入外源基因的动植物，且外源基因能通过繁殖而传代。 BamHⅠ和BstⅠ 14、同尾酶：不同来源的限制性核酸内切酶识别与切割的核苷酸靶序列也各不相同，但都产生相同的粘性末端 15、星号反应：酶的识别效率降低的现象。 16、质粒：独立于细菌染色体外、具有自主复制能力的共价双链闭合环状DNA分子。 17、克隆载体：使目的片段能在细菌细胞中复制的载体 18、表达载体：使目的基因能在细菌细胞表达为RNA或蛋白质的载体 19、cosmid克隆载体：人工构建的含有λDNA的cos位点序列和质粒复制子的特殊类型的质粒载体 20、荧光定量 PCR：是一种通过荧光染料或荧光标记的特异性的探针,对PCR产物进行标记跟踪,实时在线监控反应过程,结合相应的软件可以对结果进行分析,计算待测样品的初始模板量的PCR技术。 22、转基因技术：转基因技术是指用人工分离和修饰过的外源基因通过载体、媒体或其他物理、化学方法导入植物细胞中并得到整合和表达，并通过对转化植株的鉴定选择，从而使其遗传性状发生改变的技术。创造出人类所需要的新品种或新物种。 23、转基因食品：以转基因生物为食品或为原料加工生产的食品 24、DNA变性：在物理或化学因素的作用下，导致两条DNA链之间的氢键断裂，而核酸分子中的所有共价键则不受影响。 2DNA复性：当促使变性的因素解除后，两条DNA链又可以通过碱基互补配对结合形成DNA双螺旋结构。 2、退火：指将温度降至引物的TM值左右或以下，引物与DNA摸板互补区域结合形成杂交链。转化：指质粒DNA或以它为载体构建的重组DNA导入细菌的过程。 15-30bp，常用为20左右。 引物的有效长度不能大于 38 mer，否则最适延伸温度会超过TaqDNA聚合酶的最适温度（74℃），不能保证PCR扩增产物的特异性 ②引物扩增跨度：以500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段 ③引物碱基：G+C含量以40-60%为宜。 G+C太少扩增效果不佳，G+C 过多易出现非特异条带；ATGC最好随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列 ④避免引物内部出现二级结构。 避免两条引物间互补， 特别是 3’端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异性的扩增条带 ⑤引物 3’端的碱基要求严格配对。 特别是最末及倒数第二个碱基，以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败 ⑥引物中有或能加上合适的酶切位点。 被扩增的靶序列最好有适宜的酶切位点，这对酶切分析或分子克隆很有好处 ⑦引物的特异性：引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性 ⑧引物量适宜： 每条引物的浓度0.1 ~ 1umol或10 ~ 100 pmol，以最低引物量产生所需要的结果为好 引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增，且可增加引物之间形成二聚体的机会 3、用哪些方法可以检测转基因植物中的外源基因？ 报告基因的表达检测 转基因植物的PCR检测 外源基因整合的Southern杂交鉴定 外源基因转录的Northern杂交检测 外源基因表达蛋白的检测 生物学鉴定 4、试述作为克隆载体的DNA分子必须具备的条件。 答：（1）具有复制起点 （2）具有抗菌素抗性基因 （3）具有若干限制酶单一识别位点 （4）具有较小的相对分子质量和较高的拷贝数。 5、细菌质粒的一般生物学特性? 1）很多细菌中已发现； 2）是独立于细菌染色体之外的辅助性遗传单位，基因组绝大部分为双链环状DNA，不同质粒大小各异； 3）大多数质粒的宿主范围较窄； 4）已发展进化出多种机制以维持其在细菌宿主中的稳定的拷贝数；在不同的宿主细胞中拷贝数可能不同。 5）复制转录的进行依赖于宿主编码的酶和蛋白质； 6）常含有一些编码对细菌宿主有利的酶的基因。 6、什么是限制性内切核酸酶的星号活性? 受哪些因素影响? 星号活性：在非理想的条件下，内切酶切割与识别位点相似但不完全相同现象 7、切