第三章载体全章-DHY版黑白版…要点.pptVIP

第三章 基因工程的载体 第一节　质粒载体 一、质粒的一般特性 (一) 质粒的分布及数量 质粒广泛地分布于原核生物细胞中，也存在于某些真核细胞（酵母的2μ环状质粒）。 一个细胞内的质粒数量变化也很大，有1至几个的，也有几十个的，甚至有数百个。这取决于质粒的复制类型。 (二)质粒DNA的构型 三种不同的构型： SC构型（图c)：超螺旋形态存在的共价闭合环形DNA (cccDNA) OC构型)(图b)：开环DNA(ocDNA) L构型(图a): 线形DNA分子 (三)质粒DNA的生物学特性 (1)寄生性： (2)稳定性： (3)同源性： (4)重组性： (四)质粒的命名原则 1976年提出 二、构建理想质粒载体必须具备的条件 (一)理想质粒拷贝数较高 三、常用的质粒载体 “天然质粒”：pSC101。 pSC101质粒载体是第一个成功用于克隆真核DNA的大肠杆菌天然质粒载体。 pSC101缺点： pGEM系列与pUC系列之间的主要差别 pGEM具有两个来自噬菌体的启动子，即T7启动子和SP6启动子，它们为RNA聚合酶的附着作用提供了特异性的识别位点。 受体菌必须表达噬菌体RNA聚合酶，如：E.coli BL21（DE3）。 4、TA克隆载体 Taq DNA聚合酶可以在PCR产物的3’端加上一个非配对的脱氧腺嘌呤核苷（A）。 根据这一特点研制出了一种线性质粒，其5’