备考浙大博士分子生物学复习题.docVIP

一、胰岛素的信号转导途径 胰岛素(包括IGFI、IGFII) 信号所激发的信号传递途径主要有二,一为Ras-MAPK途径，一为PI3-激酶途径。 (一) Ras-MAPK途径　当胰岛素或IGF 与胰岛素受体结合后，引起受体自身磷酸化而活化（酪氨酸激酶的活性胰岛素受体底物(IRS) IRS-1和SHc等-1、RNA 聚合酶II等许多转录因子活化，进而促进c-fos，c-jun的表达。 Ras-MAPK信号通路可概括如下： 配体→RPTK→adaptor（如Grb2）→GEF→Ras→Raf（MAPKKK）→MAPKK →MAPK→进入细胞核→转录因子→基因表达。 通过Ras-MAPK传递途径可促使靶细胞基因表达，导致细胞生长、增殖及分化。 (二) 磷脂酰肌醇3-激酶( PI3-K) 途径　 PI3-K 的SH2 结构域能与含磷酸酪氨酸残基的信号分子如IRS-1 结合，SH3 结构域能与富含脯氨酸的各种信号蛋白结合。当胰岛素或IGF作用于胰岛素受体后, PI3-K 与酪氨酸磷酸化的IRS-1 结合，激活催化活性，PI3-K的靶蛋白是蛋白激酶B ( PKB) 。PKB 是Ser/ Thr 蛋白激酶家族的成员,。当胰岛素及IGF 作用于靶细胞时迅速引起PKB 的活化，并使PKB从细胞膜脱落，进入胞质，进而对胞质内的靶蛋白发挥作用。PKB的靶蛋白有：磷酸果糖激酶-2，与糖酵解的调控有关；糖原合成激酶3(glycogen synthase kinase 3，GSK3)；受PKB磷酸化后GSK3活性降低，再使糖原合成酶因磷酸化减少而活性增加，从而导致糖原合成增加。此外, GSK3与mRNA 转录起动的活化也有关。参与细胞凋亡的Bad蛋白也是PKB 的底物，PKB使Bad磷酸化而转变成无活性形式，从而抑制细胞凋亡。此外, PKB 还与葡萄糖的转运、细胞增殖、分化及细胞周期的调节等有关。 二、JAK-STAT 信号转导途径 JAK（just another kinase 或janus kinase）是一类非受体酪氨酸激酶家族，已发现四个成员，即JAK1 、JAK2 、JAK3 和TYK1，其结构不含SH2 、SH3，C 段具有两个相连的激酶区。 JAK 的底物为STAT，即信号转导子和转录激活子（signal transducer and activator of transcription，STAT），具有SH2 和SH3 两类结构域。STAT 被JAK 磷酸化后发生二聚化，然后穿过核膜进入核内调节相关基因的表达，这条信号通路称为JAK-STAT 途径 JAK-STAT 途径 1、配体与受体结合导致受体二聚化； 2、二聚化受体激活JAK； 3、JAK 将STAT 磷酸化； 4、STAT 形成二聚体，暴露出入核信号； 5、STAT 进入核内，调节基因表达。 RFLP（Restriction Fragment Length Polymorphism, RFLP）限制性片段长度多态性当用限制性内切酶切割不同品种的DNA时，产生相当多的数目和大小不等的DNA片段。（Random Amplified Polymorphism DNA, RAPD）随机扩增多态性DNA利用随机（一般为10 bp）引物PCR扩增，然后用凝胶电泳分开扩增片段。与RAPD技术相类似的还有AP-PCR（Arbitrary Primed PCR）和DAF（DNA Amplified Fingerprints）2种标记技术。在AP-PCR分析中，所使用的引物较长（通常10～50 bp），扩增分为3个部分，每个部分要求的条件和组分的浓度存在差异。DAF是一种改进的RAPD分析技术，与RAPD技术不同的是它使用引物浓度更高，长度更短（一般5～8 bp），只有2个温度循环，并常用聚丙烯酰胺凝胶电泳，所提供谱带信息比RAPD大得多。AFLP（Amplified fragment length polymorphism，AFLP） 扩增片段长度多态性，AFLP是RFLP和PCR结合的产物，其基本原理是：将基因组DNA进行限制性内切酶酶切，然后选择特定的片段进行PCR扩增，使用双链人工接头与基因组DNA的酶切片段相连接作为扩增反应模板，接头与接头相邻的酶切片段的几个碱基序列作为引物的结合位点。这样就只有那些两端序列能与选择碱基配对的限制性片段被扩增，再在高分辨力的测序胶上分开这些扩增产物。该技术的独特之处在于所用的专用引物可在不知道DNA信息的前提下就可对酶切片段进行PCR扩增。是目前一种十分理想有效的分子标记STS（Sequence-Tagged Site, STS）序列位点基因组上作为界标并能通过PCR被唯一操作的短的单拷贝DNA 序列，用于产生作图位点测定一系列STS 的次序即可作出基因