2.2_土壤中分解尿素的细菌的分离与计数.pptVIP

尿素[CO(NH2)2]——重要的农业氮肥。 只有被土壤中细菌分解为NH3才能被植物吸收利用 原理 1个菌落→1个活菌 二、实 验 设 计 三、结果分析与评价 四、课 题 延 伸 * 课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 脲酶 课题背景 CO(NH2)2 + H2O CO2 +2NH3 1、实例：PCR技术 启示： 原因： PCR技术：要求使用耐高温（930C）的DNA聚合酶。 （一） 筛 选 菌 株 筛选： Taq细菌 因为热泉温度70～800C，淘汰了绝大多数微生物。 寻找目的菌种时要根据它对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找。 2、实验室中微生物的筛选原理 人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括营养、温度、pH等)，同时抑制或阻止其他微生物生长。 KH2PO4 1.4g NaHPO4 2.1g MgSO4 H2O 0.2g 葡萄糖 10.0g 尿素 1.0g 琼脂 15.0g 将上述物质溶解后，用蒸馏水定容到1000mL。 该培养基的配方中，为微生物的生长提供碳源和氮源的分别是什么物质？ 此配方能否筛选出产生脲酶的细菌？为什么？ 碳源：葡萄糖、尿素 氮源：尿素 能。只有产生脲酶的 细菌能利用尿素作为氮源而生存。 能分解尿素的细菌的筛选 根据培养基配方，回答下列问题： 结果：培养一定时间后，该菌数量上升，再通过稀释涂布平板等方法对它进行纯化培养分离。 在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，称做选择培养基。 方法 运用稀释涂布平板法来统计样品中的活菌数。 （二） 统计菌落数目 ①为了保证结果准确，一般选择菌落数在30—300的平板上进行计数。 ②为使结果接近真实值，需培养计算出三个或三个以上的平板菌落平均数。 ③统计的菌落往往比活菌的实际数目低。 注意事项 阅读教材22页“（二）统计菌落数目”一段，并讨论教材中提出的问题。 甲：没有重复实验（至少涂布3个平板） 乙：A组结果误差过大，不应用于计算平均值 计算公式： 某同学在稀释倍数为106 的培养基中测得 平板上菌落数的平均数为234，那么每克样 品中的菌落数是（涂布平板时所用稀释液 的体积为0.1ml） ( ) A. 2.34×108 B. 2.34×109 C. 234 D. 23.4 B 每克样品中的菌株数 =（C÷V）×M 设置对照的主要目的是排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。 阅读P22～23页“（三）设置对照”一段讨论教材中提出的问题。 方案一：由其他同学用与A同学相同土样进行实验 方案二：将A同学配制的培养基在不加土样的情况下进行培养，作为空白对照，以证明培养基是否受到污染。 结果预测：如果结果与A同学一致，则证明A无误；如果结果不同，则证明A同学存在操作失误或培养基的配制有问题。 小结： 菌落 计数 制培养 基 样品稀释 涂布平板 土壤取样 准备牛肉膏蛋白胨培养基和选择培养基。 相同的菌液，在牛肉膏蛋白胨培养基上生长的菌落数目应明显多于选择培养基上的数目，因此，牛肉膏蛋白胨培养基可以作为对照，用来判断选择培养基是否起到了选择作用。 （1）制培养基 （2）土壤取样 ? 从肥沃、湿润的土壤中取样。先铲去（铲已经过消毒处理）表层土3cm左右，再取样，将样品装入事先灭菌过的信封中。 稀释倍数为 101 ～106。每个稀释度均用3个选择培养基。 （3）样品稀释涂布? （4）微生物的培养与观察? 在菌落计数时，每隔24h统计一次菌落数目。 选取菌落数目稳定时的记录作为结果，以防止因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目。 培养不同微生物往往需要不同培养温度。 细菌：30～37℃培养1～2d 放线菌：25～28℃培养5～7d 霉菌：25～28℃的温度下培养3～4d。 1.培养物中是否有杂菌污染以及选择培养基是否筛选出菌落 对照的培养皿在培养过程中没有菌落生长，说明培养基没有被杂菌污染。牛肉膏培养基的菌落数目明显大于选择培养基的数目，说明选择培养基已筛选出一些菌落。 2.样品的稀释操作是否成功 如果得到了2个或2个以上菌落数目在30～300的平板，则说明稀释操作比较成功，并能够进行菌落的计数。 3.重复组的结果是否一致 如果各位同学选取的是同一种土样，统计的结果应该接近。如