DNA重组技术的基本工具HF解读.pptVIP

　　⑴具多个限制酶切点，以便与外源基因连接 　　⑵能够在宿主细胞中复制并稳定地保存 　　⑶具有某些标记基因，供重组DNA的鉴定和选择　 作为运载体必须具备哪些条件？ 　⑴作为分子运输车——运载体，如果没有切割位点将会怎样？ 　⑵假如目的基因导入受体细胞后不能复制，转基因生物能有预想的效果吗？ 　 ⑶目的基因有没有进入受体细胞，如何去发现？ 霍乱菌的质粒多个限制酶切点，你会用它来做分子运输车吗？ （4）对受体细胞无害 如抗菌素的抗性基因、产物具有颜色反应的基因等。 运载体需要插入目的基因,标记基因,启动子,终止子等多种基因 例题. 在培育转基因植物的研究中，卡那霉素抗性基因（kan）常作为标记基因，只有含卡那霉素抗性基因的细胞才能在卡那霉素培养基上生长。下图为获得抗虫棉的技术流程。 请据图回答： （1）A过程需要的酶有____________________________。 （2）B过程及其结果体现了质粒作为运载体必须具备的两个条件是______________________________________。 3）C过程的培养基除含有必要营养物质、琼脂和激素外，还必须加入___________。 限制酶和DNA连接酶 具有标记基因???? 能在宿主细胞中复制并稳定保存 卡那霉素 小结．基因工程的基本工具 作用 作用 部位 限制酶 DNA连接酶 载体 切割目的基因和载体 连接DNA片段，形成重组DNA 携带目的基因进入受体细胞 核苷酸的脱氧核糖与磷酸间形成的磷酸二酯键 限制酶 DNA连接酶 载体 作用 特点 (条件) 常用 类型 学.科.网 zxxk. (1)识别特定的核苷酸序列 (2)在特定位点上切割 (1)E·coli DNA连接酶只连接黏性末端 (2)T4DNA连接酶连接黏性末端和平末端 (1)能在宿主细胞内稳定存在并大量复制 (2)有多个限制酶切割位点 (3)具有特殊的标记基因 EcoRⅠ限制酶 SmaⅠ限制酶 E·coli DNA连接酶 T4DNA连接酶 质粒、噬菌体、动植物病毒 与DNA有关的各种酶比较 名称 作用 参与生理过程 位点 (如图) DNA连接酶 连接两个DNA片段 基因工程 DNA复制 a DNA聚合酶 在脱氧核苷酸链上添加单个脱氧核苷酸 a 限制酶 识别某种特定的脱氧核苷酸序列并在特定位点切开磷酸二酯键 基因工程 a RNA聚合酶 在核苷酸链上添加单个核糖核苷酸 转录 a 解旋酶 使碱基间氢键断裂形成单脱氧核苷酸链 DNA复制及转录 b 逆转 录酶 以RNA为模板合成DNA 逆转录、基因工程 a 从结构上分析，为什么不同生物的DNA能够连接在一起？ ①_______________________________ ②_______________________________ 具有共同的DNA双螺旋结构 同种限制酶切割后形成的粘性末端或 平末端相同（或粘性末端可以碱基互补配对） ……GAATTC…… ……CTTAAG…… ……GAATTC…… ……CTTAAG…… EcoRⅠ ……GAATTC…… ……CTTAAG…… ……GAATTC…… ……CTTAAG…… 不同来源的DNA片段混合 将不同种来源的DNA片段连接起来 生物A基因片段 生物B基因片段 ……G　　AATTC…… ……CTTAA　　G…… 酶切 ……GAATTC…… ……CTTAAG…… ……G　　AATTC…… ……CTTAA　　G…… ……G　　AATTC…… ……CTTAA　　G…… 同一种 1） 载体DNA必需有一个或多个限制酶的切割位点，以便目的基因可以插入到载体上去。这些供目的基因插入的限制酶的切点所处的位置，还必须是在质粒本身需要的基因片段之外，这样才不至于因目的基因的插入而失活。 2） 载体DNA必需具备自我复制的能力，或整合到受体染色体DNA上随染色体DNA的复制而同步复制。 3） 载体DNA必需带有标记基因，以便重组后进行重组子的筛选。 4） 载体DNA必需是安全的，不会对受体细胞有害，或不能进入到除受体细胞外的其他生物细胞中去。 5） 载体DNA分子大小应适合，以便提取和在体外进行操作，太大就不便操作。 实际上自然存在的质粒DNA分子并不完全具备上述条件，都要进行人工改造后才能用于基因工程操作。 小结 基因工程 的工具 限制 酶 主要存在于原核生物中 具有专一性(识别序列) 切开DNA分子的磷酸二酯键 DNA连 接酶 连接磷酸二酯键 种类 E.coliDNA连接酶 T4 DNA连接酶 运载 工 具 具备的 条件 能在宿主细胞中自 我复制并稳定存在 具一个多个限制酶切位点 具标记基因 质粒、 λ噬菌体衍生物 、动植物病毒 例题、20世纪70