第一章抗原抗体反应技术方案.pptVIP

(2)特异性与亲和力: 特异性和亲和力是影响血清学反应的两个关键因素，它们共同影响试验结果的准确程度。 免疫动物早期获得的抗血清特异性较好，但亲和力低；后期获得的抗血清一般亲和力较高，但长期免疫易使免疫血清中抗体的类型和反应性变得更为复杂。 因此，用于诊断的试剂必须尽量选用特异性高、亲和力强的抗体，才能保证和提高试验结果的可靠性。 （3）浓度: 抗体的浓度往往是与抗原相对而言。合适的浓度才出现明显的反应现象。因此许多试验应进行抗体预滴定，找出最适反应浓度。 l.电解质 抗原抗体结合后由亲水性变为疏水性，此时易受电解质影响，如有适当浓度电解质存在，就会使抗原抗体失去一部分电荷而相互凝集或沉淀，出现可见反应;若无电解质存在，则不出现可见反应。通常在血清学试验中，以8.5% NaCl溶液作为抗原抗体的稀释液及反应液，其中Na+和Cl-可分别中和胶体颗粒上的电荷，使胶体颗粒的电势下降，形成可见的沉淀物或凝集物。但如果电解质浓度过高，则会出现非特异性蛋白质沉淀，即盐析。 二、环境因素 2.酸碱度 合适的pH是抗原抗体反应的必要条件之一。血清学试验一般以pH6-9为宜，超出此范围可影响抗原和抗体的理化性质，导致假阳性或假阴性结果。当pH为3左右时，接近细菌抗原的等电点，可出现非特异性酸凝集，造成假象。 3.温度 抗原抗体反应一般在15-40℃范围内均可进行，最适温度为37℃。在此范围内温度越高，分子运动速度加快，增加抗原抗体接触机会，反应速度越快，但亦容易引起复合物解离;温度越低，反应速度缓慢，但抗原抗体结合牢固，易于观察。某些特殊的抗原抗体反应需要特定的温度，如冷凝集素在4℃时与红细胞结合，20℃以上反而解离。 4、作用时间 抗原抗体反应应有足够的时间，不同反应时间不同。 此外，抗原抗体反应在液相中反应时，适当振荡与搅拌，也可促进抗原抗体分子的接触，加速反应。 电解质: 生理盐水或缓冲液 酸碱度: pH6～pH9 温 度: 15℃～40℃，37℃最适 二、环境因素 反应类型 实验技术 结果判断 凝集反应 直接凝集试验 观察凝集现象 间接凝集试验 同上 抗球蛋白试验 同上 沉淀反应 液相沉淀试验 观察沉淀，检测浊度 免疫电泳技术 观察扫描沉淀峰、沉淀弧 补体参与的反应 补体溶血试验 观察测定溶血现象 补体结合试验 同上 第四节 免疫学检测技术的类型 反应类型 实验技术 结果判断 中和反应 病毒中和试验 检测病毒感染性 毒素中和试验 检测外毒素毒性 标记免疫反应 荧光免疫技术 检测荧光现象 放射免疫技术 检测放射性强度 酶免疫技术 检测酶底物显色 发光免疫技术 检测发光强度 金免疫技术 检测金颗粒沉淀 原理：将可溶性抗原层积于抗体之上，如果二者相应，则可在抗原、抗体两液接触界面形成白色的沉淀环 环状沉淀反应 试验组 阳性对照组 阴性对照组 原理： 可溶性Ag与Ab在含有电解质的半固体（1%）琼脂内进行自由扩散，当两者由高浓度向低浓度扩散相遇时，如果二者相对应而且比例适当，则可在相遇处形成白色的沉淀线，为阳性反应。另外，沉淀带对于组成它的Ag、Ab具有特异地不可透过性，而对其它的Ag与Ab是可透过的，所以一条沉淀带仅代表一种AgAb系统的沉淀物。 双向琼脂扩散试验 检测抗原制备技术 抗原是一类能刺激机体免疫系统产生特异性免疫应答，并能与相应免疫应答产物（抗体或致敏淋巴细胞）在体内外发生特异性反应的物质，或称免疫原。 完全抗原:反应原性+免疫原性 半抗原(不完全抗原):只具备反应原性而无免疫原性的物质。 ?来源于病原体及其病原体的代谢、分泌和排泄物等天然抗原，均可作为良好的检测抗原。 其种类，因病原体的种株不同而异。微生物中的衣原体、支原体、细菌、螺旋体、立克次体、真菌和放线菌等病原体表层结构蛋白以及各种外毒素、内毒素和酶等毒力因子，噬菌体、病毒的各种结构蛋白，如衣壳蛋白、包膜上的各种糖蛋白、基质蛋白以及病毒编码的复制酶等均是良好的检测抗原。 ?大多数寄生虫是多细胞生物，其抗原具有复杂性、多源性，同时又具有种属和生活史不同期的特异性。来源于虫体结构性物质的虫体抗原、虫体排泄物和分泌物中的蛋白或多肽类、糖脂或多糖等代谢性抗原以及生活虫体排放或脱落到宿主体内可出现于血循环的大分子微粒性循环抗原等均可作为检测抗原。 抗生素等药物因其分子量较小，不具有抗原性。与牛血清白蛋白等大分子偶联后才具有完全抗原的特性。 ?来源于自然感染或人工感染以及人工培养病原生物体的生物大分子物质，如蛋白质、多肽、酶类等，必须进行分离纯化，才能作为特异性较好的检测抗原。 分离纯化方法有选择性沉淀法、有机溶剂沉淀法、等电点沉淀法、电泳法、超速离心法、层析法等。 其中用于蛋白质和酶的提取，多采用选择性沉淀法、有机