SSR分子标记技术在美洲黑杨品种鉴别中的应用解析.docVIP

SSR标记技术在美洲黑杨品种鉴别中的应用 摘要 美洲黑杨是世界著名的速生树种，材质软、纤维好，是纸浆和人造板的极佳原料。在其蓬勃发展过程中，造林种苗是否为真实的优良品种，如同优良品种的选育本身一样，杨树林优质高产的基础。现代分子标记技术的应用，为植物新品种的鉴定提供了准确可靠的技术手段。其中微卫星标记（SSR技术）是目前不同标记类型中，用于植物品种遗传真实性鉴定的最高效的分子标记,该技术的发展势必为美洲黑杨在我国的引种和繁育营造更加广阔的前景。 关键词：美洲黑杨；SSR分子标记技术；指纹图谱；品种鉴别 1研究背景 美洲黑杨（Populus deltoides Marsh.）为杨柳科（Salicacae）杨属（Populus L.）黑杨（Aigeiros）树种。落叶乔木，树形高大，干形通直圆满，尖削度小，分枝粗度中等，叶片大，心形，叶色鲜绿，观赏价值较高；美洲黑杨木材材质洁白、柔软，易加工，可广泛用于包装用材、旋切用材和纤维用材，在解决胶合板材、纸浆材、薪碳材以及生态造林等方面均发挥着重要作用。此外，美洲黑杨还具有以下优点：①生长快，产量高；②抗病虫，耐旱、耐寒、耐热；③用途广泛，经济效益好；④对土壤肥力无破坏性等[1]。 植物品种遗传真实性鉴定的关键是所依赖的技术手段。以往植物品种鉴别所采用的方法主要是依据植物的形态特征。但植物品种间在形态上的差异，特别是苗期的差异，往往并不十分显著。自上世纪八十年代以来，现代分子标记技术的应用，为植物新品种的鉴定提供了准确可靠的技术手段。 分子标记是以DNA为基础的标记技术，是指能反映生物个体或种群间基因组差异的特征DNA片段，也称DNA指纹图谱[2]。常见的分子标记有RFLP、ISSR、RAPD、AFLP 、SSRSSR即微卫星DNA，又叫简单重复序列，指的是基因组中由1～6个核苷酸组成的基本单位重复多次构成的一段DNA，广泛分布于基因组的不同位置，长度一般在200 bp以下[3]。微卫星标记是目前不同标记类型中，用于植物品种遗传真实性鉴定的最高效的分子标记。与其它分子标记相比，SSR标记具有以下优点：①数量丰富，覆盖整个基因组，揭示的多态性高；②具有多等位基因的特性，提供的信息量高；③以孟德尔方式遗传，呈共显性；④每个位点由设计的引物顺序决定，便于不同的实验室相互交流合作开发引物[4]。目前该技术已广泛用于遗传图谱的构建、目标基因的标定、指纹图的绘制等研究中。 美洲黑杨树种的繁衍和我国植树造林绿化国土事业的发展都具有长远的意义。为确保杨树产业健康发展，急需建立一套真实、简便、快速、可靠的杨树品种遗传真实性鉴定技术，以满足对杨树种苗生产的监督检查、对新品种进行认定，以及对育种工作者的知识产权进行保护的需要。SSR分子标记技术的开发和应用，为研发微卫星品种鉴定技术,形成一套真实、简便、快速、可靠的美洲黑杨无性系品种的分子鉴定技术体系提供了关键技术支撑，为杨树产业的健康和可持续发展以及今后杨树资源的进一步开发利用提供理论依据和指导。 2 分子标记技术的应用 2.1 几种分子标记技术的比较 DNA分子标记技术能够在分子水平上直接反映物种的遗传多样性，在品种鉴定领域具有很大优势[5]。但不同的分子标记有不同的优势，在品种鉴定方面也各有利弊，挑选适宜的标记方法成为了品种鉴别的关键。其中，随机扩增多态性DNA（random amplified polymorphic DNA，RAPDamplified fragment length polymorphism，AFLP简单序列重复区间inter-simple sequence repeat，ISSRsimple sequence repeat，SSR等分子标记被和亲缘关系分析[6]。利用分子标记技术进行植物新品种检测限制性内切酶片段长度多态性RFLP）标记技术是发展最早的分子标记技术，是指基因型之间限制性片段长度的差异，这种差异是由限制性酶切位点上碱基的插入、缺失、重排或点突变所引起的[7]。但这种方法所需DNA量较大，操作技术复杂，对操作人员和仪器设备均要求较高，因此其在指纹图谱构建中的应用受到了限制[8]。随机扩增多态性DNA（RAPD）是建立在PCR(Polymerase Chain Reaction)基础之上的一种可对整个未知序列的基因组进行多态性分析的分子技术[]。DNA溶解温度较低，扩增结果易受DNA片段大小的影响[]。而且，该技术的稳定性和重复性差，实验结果的可靠性AFLP）也是基于PCR反应的一种选择性扩增限制性片段的方法。选择性碱基的种类、数目和顺序决定了扩增片段的特殊性[]。该技术具有可靠性好，重复性强，等优点，AFLP引物是根据通用接头序列设计的，没有物种特异性。这对DNA提取的质量要求很高，容易受到外源DNA的信号干扰。而植物材