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《生物技术实践》（选修1）高考复习资料 第四部分、浅尝现代生物技术 一、教学要求 本部分“实验12：乳酸脱氢酶同工酶的分离”与“实验13：DNA片段的PCR扩增”不作要求；只要求学生做1个实验，即“实验11：植物的组织培养”。 实验11　植物的组织培养 基本要求 1．进行菊花的组织培养 2．尝试植物激素的应用 发展要求 二、基本内容 1、原理：植物细胞的全能性 2、基本过程： 3、 影响植物组织培养的条件： （1）材料： 植物的种类、材料的年龄和保存时间的长短等都会影响实验结果。菊花组织培养一般选择未开花植物的茎上部新萌生的侧枝作材料。一般来说，容易进行无性繁殖的植物容易进行组织培养。选取生长旺盛嫩枝进行组培的是嫩枝生理状态好，容易诱导脱分化和再分化。 （）激素： 在培养基中需要添加生长素和细胞分裂素等植物激素，其浓度、使用的先后顺序、用量的比例等都影响结果。使用顺序 实验结果 先生长素， 后细胞分裂素 有利于分裂但不分化 先细胞分裂素， 后生长素 细胞既分裂也分化 同时使用 分化频率提高 生长素／ 细胞分裂素比值与结果 比值高时 促根分化， 抑芽形成 比值低时 促芽分化， 抑根形成 比值适中 促进愈伤组织生长 （）营养： 常用的培养基是MS培养基，其中含有的大量元素是N、P、S、K、Ca、Mg，微量元素是Fe、Mn、B、Zn、Cu、Mo、Cl、Ni、I、Co，有机物有甘氨酸、烟酸、肌醇、维生素、蔗糖等。 （4）环境条件： PH、温度、光等环境条件。 4、操作流程 （1）配制MS固体培养基： 配制各种母液：将各种成分按配方比例配制成的浓缩液。使用时根据母液的浓缩倍数，计算用量，并加蒸馏水稀释。 配制培养基：应加入的物质有琼脂、蔗糖、大量元素、微量元素、有机物和植物激素的母液，并用蒸馏水定容到1000毫升。在菊花组织培养中，可以不添加植物激素，原因是菊花茎段组织培养比较容易。 灭菌：采取的灭菌方法是高压蒸汽灭菌。 MS培养基中各种营养物质的作用是什么？ 与肉汤培养基相比，MS培养基有哪些特点？大量元素和微量元素提供植物细胞所必需的无机盐；蔗糖提供碳源，维持细胞渗透压；甘氨酸、维生素等物质主要是为了满足离体植物细胞在正常代谢途径受到一定影响后所产生的特殊营养需求。微生物培养基以有机营养为主，MS培养基则需提供大量无机营养。 （2）外植体的消毒 （3）接种： 接种过程中插入外植体时形态学上端朝上，每个锥形瓶接种7～8个外植体。外植体接种与细菌接种相似，操作步骤相同，而且都要求无菌操作。 （4）培养： 应该放在无菌箱中进行，并定期进行消毒，保持适宜的温度和光照 （5）移栽： 栽前应先打开培养瓶的封口膜，让其在培养间生长几日，然后用流水清洗根部培养基。然后将幼苗移植到消过毒的蛭石或珍珠岩等环境中生活一段时间，进行壮苗。最后进行露天栽培。 （6）栽培 外植体在培养过程中可能会被污染，原因有外植体消毒不彻底；培养基灭菌不彻底；接种中被杂菌污染；锥形瓶密封性差等。 三、习题训练 辣椒是某市北运蔬菜的重要品种之一，但近年有退化、减产的趋势，如想通过花药离体培养的方法，培育优质、高产、无病毒的辣椒苗，请你完成下面的辣椒苗培育方案。 （1）材料的选取。用 法镜检花药，一般当花粉粒处于 期时，可用作培育的材料，此期的花粉粒的特点是 ，核位于细胞的中央。 （2）培养原理。右图是温度与花药的胚诱导率关系图，在 ℃时，胚的诱导率最高。 （3）材料的准备。取辣椒花蕾用体积分数为。70％的酒精浸泡约30s，立即取出，在 中清洗。 取出后吸干水分，放入质量分数为0.1％的 溶液中2～4min，??取出再冲洗3～5次。 （4）接种和培养。接种用的花药要彻底除去花丝，因为与花丝相连的花药不利于的形成，基本培养基用 培养基，在培养基中要加入蔗糖做碳源，加入适量的生长素和细胞分裂素等物质，进行严格的消毒，就可用于花药的培养了。 （5）鉴定和筛选。经过一段时间的培育，花药开裂后，会释放出胚状体，一个花药内能产生多个幼小植株。幼小植株需要移到新的培养基上继续培养。培养出来的植株要作鉴定和筛选的原因是 。 （1）在制作腐乳、果醋、泡菜的过程中不需要氧气的是 。在制作泡菜的过程中检验亚硝酸盐时所出现