实验三细胞膜的通要点.ppt

实验七 细胞活体染色技术 一、实验目的 1．学习细胞活体染色的方法。 2．观察动、植物活细胞内线粒体，液泡系的形态、数量与分布。 二、实验原理 活体染色是利用某些无毒或毒性很小的染料来显示细胞内某些天然结构，而不影响细胞的生命活动或产生任何物理、化学变化以致引起细胞的死亡。 一般的生物材料不能穿透细胞膜，只有当细胞被固定后，细胞膜被破坏，染料才能进入细胞内部。但是，有一些染料（称“活体染料”）却能进入活细胞，它们是一些无毒或毒性很小的染色剂，能使细胞中某些特定结构着色。活体染料基本上不影响或很少影响细胞的生命活动。 Janus green B ?neutral?red Trypan blue 三、实验用品 (一)材料：黄豆根尖、洋葱、小鼠。 (二)器械：显微镜、镊子、刀片、’剪刀、解剖针、表面皿、载玻片、盖玻片、 吸管、收水纸等。 (三)试剂： L．Ringer氏液 NaCl 0．90g KCl 0．42g CaCl2 0．25g 2．1／3000中性红溶液 先配制l％的中性红Ringer氏原液，因中性红难溶解，需稍加热，(30℃-40℃)使之溶解，过滤，将滤液装入棕色瓶中暗处保存，临用前取少许原液用Ringer氏液稀释成1／3000的中性红溶液。 3．1／5000詹纳斯绿B 先配制1％詹纳斯绿B溶Ringer氏溶液，方法同上。 4．台盼蓝染色液 将l克台盼蓝溶于100毫升生理盐水中 5．香柏油、二甲苯、蒸馏水等。 四、实验步骤 取材 染色 盖片 镜检 (一)液泡系的中性红活体染色 3．人口腔粘膜上皮细胞线粒体的超活染色观察 取清洁载玻片放在37℃恒温水浴锅的金属板上， 滴2滴1／5000詹纳斯绿B溶液。 用牙签取口腔上皮细胞，将刮下的粘液状物放入载玻片的染液滴中，染色10一15分钟(注意不能干燥)，盖上盖片，吸去多余的溶液，即可镜检。 （三）台盼蓝染色鉴别死活细胞。 抽取小鼠腹腔水细胞涂于洁净载玻片上，滴加l％台盼蓝1滴，盖上盖玻片于显 微镜下观察。 五.注意事项 詹纳斯绿B 染液必须现用现配，以保持他充分氧化的能力。 对植物细胞惊醒观察时一定要尽量让细胞展开 对口腔上皮细胞进行染色时不可使染色剂干燥，可适当补充染液 * 线粒体 液泡 鉴别活细胞和死细胞 切取黄豆芽根尖 纵切断面(约l-2cm2) 在载玻片中央滴加中 性红染料染色 5-10分钟 吸去染料，滴加Ringer 氏液一滴 盖片镜检 观察其形态、大小如 何、分布位置 取洋葱鳞茎内表皮一 小块(约lcm2) 在载玻片上用1/5000 詹纳斯绿B染色 约30分钟 吸出染液，滴加 Ringer氏液 盖片、镜检 （注意观察线粒体分 布及所呈形状） (二)线粒体的活体染色 *