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4.影响因素 (1)材料的选择:一般选择未开花植物的茎上部⑦________________,容易诱导⑧______________________。 (2)营养的供应:常用的培养基是⑨________________,一般需要添加⑩________和?______________两种植物激素。 (3)温度、光照、pH:进行菊花组织培养,一般将温度控制在18 ℃~22 ℃,pH控制在5.8左右,并且每日用日光灯照射12 h。 5.植物激素在植物组织培养中的作用 生长素/细胞分裂素比值高时,有利于?____________;比值低时,有利于?______________。 一、植物组织培养的过程 1.植物组织培养的原理及过程 (1)原理:细胞的全能性。 2.影响植物组织培养的因素及成功的关键 (1)影响植物组织培养的因素 ①内因:植物的种类,同一种植物材料的年龄、保存时间的长短、部位等。 (2)获得成功的关键 ①植物组织培养所利用的植物材料体积小、抗逆性差,对培养条件要求较高。 ②培养材料一旦被微生物污染,就会导致实验失败。原因是微生物增殖快,生长迅速,消耗养分多,并产生代谢废物毒害培养材料。 ③无菌技术主要包括对操作空间、实验用具、实验材料以及操作者的消毒灭菌。 3.植物激素在组织培养过程中的重要作用 生长素和细胞分裂素是启动细胞分裂、脱分化和再分化的关键性激素,其作用及特点为: (1)在生长素存在的情况下,细胞分裂素的作用呈现加强的趋势。 (2)使用顺序不同,结果不同,具体如表中所示 4.实验操作中应注意的几个问题 (1)材料的选取:菊花的组织培养实验中,应选择未开花植株的茎上部新萌生的侧枝;月季花药的培养实验中,应选择花粉发育过程中的单核靠边期的花粉进行培养。 (2)外植体消毒:所用消毒剂为体积分数为70%的酒精和质量分数为0.1%的氯化汞溶液,所使用的清洗液是无菌水。 (3)培养过程:在初期,菊花的组织培养需光照,月季花药的培养不需光照,而在后期均需光照。 (2013·南京模拟)如图为某二倍体植株花药中未成熟的花粉在适宜培养基上形成完整植株的过程。下列有关叙述正确的是(  ) A.过程①②表示脱分化,过程③表示再分化 B.过程①②需要照光 C.过程①②③说明花粉细胞具有全能性 D.通过过程③获得的完整植株自交后代不会发生性状分离 解析 A错误,过程①表示脱分化,过程②表示再分化。B错误,通常幼小植株形成后才需要照光。C正确,通过过程①②③,花粉细胞形成了完整的植株,体现了花粉细胞的全能性。D错误,通过过程③获得的完整植株是单倍体,高度不育。 答案 C 下列关于植物组织培养的叙述中,错误的是(  ) A.培养基中添加蔗糖的目的是提供营养和调节渗透压 B.培养基中的生长素和细胞分裂素影响愈伤组织的生长和分化 C.离体器官或组织的细胞都必须通过脱分化才能形成愈伤组织 D.同一株绿色开花植物不同部分的细胞经培养获得的愈伤组织基因相同 【答案】D 【解析】绿色开花植物的细胞有两种:体细胞和生殖细胞,这两种细胞所含的核型(基因)是不同的,同一株绿色开花植物不同部位的细胞经培养获得的愈伤组织基因可能不相同。 1.原理:DNA复制。 2.条件:模板、原料、酶、ATP。 3.场所:体外PCR扩增仪。 4.方向:DNA复制的具体过程涉及DNA双链的方向。DNA的两条链是反向平行的,为了明确地表示DNA的方向,通常将DNA的羟基(-OH)末端称为3′端,而磷酸基团的末端称为5′端。DNA聚合酶不能从头开始合成DNA,而只能从3′端延伸DNA链,因此,DNA复制需要引物。当引物与DNA母链通过碱基互补配对结合后,DNA聚合酶就能从引物的3′端开始延伸DNA链,因此DNA的合成方向总是从子链的5′端向3′端延伸。 5.过程 (1)变性:当温度上升到90 ℃以上时,双链DNA解旋为单链,如下图: 6.检测PCR扩增结果 (1)将样品进行50倍稀释:取2 μL PCR反应液,加入98 μL蒸馏水。 (2)以蒸馏水作为空白对照,在波长260 nm处,将紫外分光光度计的读数调节至零。 (3)将步骤(1)中的DNA稀释液加入到厚度为1 cm的比色杯中,测定其在260 nm处的光吸收值(用A260 nm表示)。 (4)根据下面的公式计算DNA含量 DNA含量(μg/mL)=50×A260 nm×稀释倍数 (1)DNA在260 nm的紫外线波段有一强烈的吸收峰,可以利用DNA的这一特点进行DNA含量的测定。 (2)据测定,1 μg/mL的DNA在厚度为1 cm比色杯中,OD260为1相当于50 μg/mL的双链DNA。以此为标准,可以计算出样品中的DNA浓度。 7.PCR技术的应用 PCR技术模拟细胞内DNA的复制过程,实现对某一段DN

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