透射电子显微镜的工作原理及标本制备.pptVIP

2）柠檬酸铅（枸橼酸铅） A.密度大，对细胞各种结构都有亲和力，尤其提高细胞膜系统和脂类物质的反差，对核糖体、糖元等着色常用。 B.铅盐毒性大（防止皮肤吸收引起铅中毒），易与CO2产生沉淀 染色的方法: A.单染: 醋酸铀单染，枸橼酸铅单染 铅盐比铀盐好,注意CO2的干扰 B.双染色: ① 醋酸双氧铀前染20～30min ② 漂洗掉多余染液 ③ 柠檬酸铅后染，15min Philips CM200-FEG 场发射枪 透射电子显微镜 透射电子显微镜 恭请各位老师 指导！ 谢谢！ * * 透射电子显微镜的工作原理及 标本制备 一透射电子显微镜的结构与原理二透射电子显微镜标本制备 透射电子显微镜(Transmission electron microscope,TEM)透射电子显微镜是以波长极短的电子束作为照明源，用电磁透镜聚焦成像的一种高分辨率、高放大倍数的电子光学仪器。 透射电镜的结构 透射电镜主要由电子光学系统、真空系统和供电系统三部分组成。其中电子光学系统通常称为镜筒，是透射电子显微镜的核心，它又可以分为照明系统、成像系统和观察记录系统。 一透射电子显微镜的结构与原理 TEM 电子光学系统（镜筒） 供电系统 真空系统 照明部分 成像放大部分 显像部分 电子枪：TEM电子源 聚光镜 物镜、中间镜、投影镜 荧光屏和照相装置 a) 透射电子显微镜 b) 透射光学显微镜 1. 电子枪 电子枪是透射电子显微镜的电子源。 常用的是热发射发叉式钨丝阴极电子枪，由发叉形钨丝阴极、栅极和阳极组成。 照明系统 照明系统的作用主要是提供一束高亮度、小孔径角、相干性好、束流稳定的照明源。 2. 聚光镜 聚光镜的作用是会聚电子枪发射出的电子束，调节照明强度、孔径角和束斑大小。一般采用双聚光镜系统。 成像系统 由物镜、物镜光栏、选区光栏、中间镜和投影镜组成。 物镜：放大倍数100—300倍。 作用：形成第一幅放大像 物镜光栏：物镜背焦面。 作用：a.提高像衬度， b.减小孔经角从而减小像差。 c.进行暗场成像 选区光栏：物镜像平面上。 作用：进行微区衍射分析。 中间镜：放大倍数0—20倍 作用a.控制电镜总放大倍数。 b.成像/衍射模式选择。 投影镜：进一步放大中间镜的像。 观察记录系统 观察和记录系统包括荧光屏和照相机构。 观察室，内有一个荧光屏，在电子束的攻击下产生荧光。操作者通过镜筒上的窗口便可观察到荧光屏上的电子图像。在观察窗口前海装有一个光学放大镜，常用它对图像进行聚焦。荧光屏下面放置感光底片或玻璃底板，将荧光屏竖起即可曝光。 新型电镜均采用电磁快门，与荧光屏联动。有的装有自动曝光装置。现代电镜已开始装有电子数码照相装置，即CCD相机。 真空系统 在电子显微镜中，凡是电子运行的区域都要求有尽可能高的真空度。 若镜筒中存在气体，会产生气体电离和放电现象； 电子枪灯丝被氧化而烧断； 高速电子与气体分子碰撞而散射，降低成像衬度及污染样品。 电子显微镜的真空度要求在10-4-10-6 Torr。 电源与控制系统 电子显微镜需要两个独立的电源，即使电子加速的小电流高压电源和使电子束聚焦与成像的大电流低压磁透镜电源。 要求电源有足够高的稳定性，因为无论是高压或透镜电流的任何波动都会引起像的移动和像面的变化，从而降低分辨本领。  透射电镜的总体工作原理是：由电子枪发射出来的电子束，在真空通道中沿着镜体光轴穿越聚光镜，通过聚光镜将之会聚成一束尖细、明亮而又均匀的光斑，照射在样品室内的样品上；透过样品后的电子束携带有样品内部的结构信息，样品内致密处透过的电子量 少，稀疏处透过的电子量多；经过物镜的会聚调焦和初级放大后，电子束进入下级的中间透镜和第1、第2 投影镜进行综合放大成像，最终被放大了的电子影像投射在观察室内的荧光屏板上；荧光屏将电子影像转化为可见光影像以供使用者观察。 二透射电子显微镜标本制备 必须把标本切成厚度小于0.1um以下的薄片才适用，这种薄片称为超薄切片。常用的超薄切片厚度是50-70nm。在透射电镜的样品制备方法中，超薄切片技术是最基本、最常用的制备技术。 由于电子的穿透能力弱，一般的组织细胞的切片，无法在电镜下获得清晰的图像。阻碍了电子显微镜的发展。 超薄切片制备的一般程序： 取材→固定→脱水→渗透→包埋→聚合→修块→切片→染色 1取材 指从生物体上取下要观察的组织块。 注意：由于水解酶的作用可引起细胞自溶 将动物