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纯化水、注射用水微生物检验方法学验证方案 （VP） 文件编号：VP-JY-0026-01 项目名称：纯化水、注射用水微生物检验方法学验证  项目 部门 职务 签名 日期 起草人 质量管理部 化验员 年 月 日 审核人 质量管理部 中心化验室主任 年 月 日 审核人 质量管理部 质量管理部经理 年 月 日 批准人 验证领导小组 质量副总经理 年 月 日 目录 1 引言 4 1.1 验证实施进度计划 4 1.2 概述 4 2 验证所需设备清单 4 3 验证人员、职责 4 3.1 项目验证小组成员 4 3.2 验证变更 4 3.3 验证培训 4 4 验证目的 5 5 验证内容 5 5.1 培养基配制 5 5.2 菌种 5 5.3 菌液的制备 5 5.4 薄膜过滤法检测微生物 6 5.5 结果评价 7 6 验证过程中的偏差及处理 7 7 验证结果的评定与结论 7 8 附件 8 1 引言 1.1 验证实施进度计划.2 概述 通过验证以确认R2A适用于薄膜过滤法检验纯化水、注射用水微生物。根据培养基及验证菌的特性制订检验方法和检验条件，按制定的方法进行试验，根据验证结果判断是否符合验证标准。若符合，则R2A可用于薄膜过滤法检验纯化水、注射用水微生物。 2 验证所需设备清单 2.1. XG1.D脉动真空灭菌器 2.2. MJ-250-I型霉菌培养箱 (20～25℃) 2.3. LPH-250生化培养箱 (30～35℃) 2.4. WG11-230BE电热鼓风干燥箱 2.5. 微波炉 3 验证人员、变更及培训 3.1 项目验证小组成员 职责 QC室主任 负责组织验证小组成员起草验证方案，组织验证工作的实施，并根据验证结果起草验证报告 QA人员 负责验证实施过程监督。 微生物检验员 负责验证的实施，对样品进行检验。 3.2 验证变更 验证过程应严格按照本方案规定的内容进行，若因特殊原因确需变更时，应填写《验证方案变更申请及批准书》(附件2)，报验证领导小组批准后执行。 3.3 验证培训 验证过程中，确认方案以及验证中应该掌握的技能应该进行培训，培训应遵循《员工培训管理规程》。培训情况记录于附件3。 4 验证目的与适用范围 4.1 验证目的 根据《中国药典》2015版四部1105项下微生物检查法的规定，验证纯化水、注射用水微生物检查方法的适用性，即确认检品、所设定的检验条件及检验程序对供试品中可能存在的各类微生物无抑制作用,其方法可行有效。 4.2 适用范围 适用于纯化水、注射用水微生物检验方法学验证。 5 验证内容 培养基在使用前应进行适用性的检查，合格后方可进行，通过R2A琼脂培养基上的菌落与营养琼脂对照培养基和TSA对照培养基上的菌落比较，以确认所采用方法的可行性。 5.1 培养基的制备 取适用性检查合格的R2A琼脂培养基按照 15.2g加入1000ml纯化水的比例进行配制， 加热使其完全溶解，分装于的锥形瓶中,装量不得超过容器的三分之二，盖塞，用无菌布包扎好后进行湿热灭菌121 ℃、15min，灭菌后PH值7.2±0.2。冷却后放入2～8℃冰箱备用。 5.2 菌种 铜绿假单胞菌〔CMCC（B） 10104〕 金黄色葡萄球菌〔CMCC（B） 26 003〕 枯草芽孢杆菌〔CMCC（B） 63 501〕 白色念珠菌〔CMCC（F）98001〕 黑曲霉〔CMCC（F）98003〕 使用以上各种菌株传代次数均不得超过5代 5.3 菌液的制备： 接种金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至胰酪大豆胨液体培养基上， 30～35培养18～24 小时；接种白色念珠菌的新鲜培养物至沙氏葡萄糖液体培养基上，20～25培养2～，上述培养物用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml 含菌数～100CFU（菌落形成单位）的菌悬液。接种黑曲霉的新鲜培养 物至沙氏葡萄糖琼脂斜面培养基上，20～25培养5～7 天，加入3～5ml 含0.05％（v/v）聚山梨酯80 的0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。然后，采用适宜的方法吸出孢子悬液至无菌试管内，用含0.05％（v/v）聚山梨酯80 的0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml 含孢子数～100CFU 的孢子悬液。菌悬液在室温下放置应在2 小时内使用，若保存在2～8可在24 小时内～～～结果评价％％ 7 验证结果的评定与结论 验证各项验证工作结束后，验证项目小组负责收集、汇总各项验证、试验结果记录，依据各项验证结