免疫学性能验证重点.pptVIP

免疫检验的质量控制及性能验证 李小花 2015.08.12 质量控制 报告单申请 样本采集/接收 样本检测 检测结果的获得 结果分析及报告发放 影响检验结果的要素 人员 设施和环境条件 实验室设备 温湿度控制 培训、比对 设备操作、校准 内部质量控制 操作规程 试剂 性能验证 SOP文件 室内质控程序 应参考试剂盒说明书上明确标示的性能参数进行验证 至少应包括：检出限、符合率 定量方法应验证精密度 试剂性能验证 重点 EP5A2 EP15A2 EP6A EP17A EP12 Clinical Laboratory and Standards Institute (CLSI) 涉及免疫评价方法 医学实验室精密度和准确度的确认 定量测定方法精密度方法 定量测定方法线性的评价 检出限与定量限的评价 定性检测评价 临床实验室标准化协会 EP17A 空白限、检测低限、定量限的验证 Limit of blank(LOB) 空白限 Limit of detection(LOD) 检出限 Limit of quantitation(LOQ)定量限 LOB LOD≤LOQ 是一定概率下(α)测量空白时可能得到的最高检测结果，低浓度LOD的样本在一定概率下(β)能得到的最低测量结果。 误判概率α、β：声称在给定物质中存在某成分的误判概率为α时（Ⅰ类错误，假阳性），声称不存在该成分的误判概率为β（Ⅱ类错误，假阴性）。 α、β默认值为0.05。 空白限（LOB） α= 假阳性可能 β= 假阴性可能 相 对 频 率 0 LoB LoD LoQ总误差 报告 α β 不能检出 能检出 能检出 可检测 LoB LoD LoQ 空白限（LOB） 检出限(LOD) 是检测方法可检测出的最低被测物浓度，也称为检测低限或最小检出浓度。 定量限(LOQ) 是指在精密度和正确度可接受的情况下检测系统能够得到可靠结果的被测物最低浓度，分析物在这个浓度下被可靠检出。 测定空白样本20次 测定结果与试剂厂家给定的LOB比较，不超过3个结果大于LOB验证通过。 验证空白限（LOB） 验证LOD 选择被测量的低浓度（LOB-4LOB）样本，获取至少20次测量结果（多个样本，多天完成）。 计算大于LOB的测定结果所占比例是否符合（β=0.05）要求。 符合要求，验证通过； 不符合，联系厂家。 检测低限（LOD） 定量检出限（LOQ） 选择浓度≥LOD的样本，测定25次（多样本，多天，重复完成），每个样本测定结果与参考值的偏差和TEa（实验室总误差）相比较。 计算小于TEa所占比例是否符合（β=0.05）的要求。 符合要求，验证通过； 不符合，联系厂家。 Lower bound of observed proportion（%） 20 85 30 87 40 88 50 88 60 88 70 89 80 89 90 90 100 90 150 91 200 92 250 92 300 92 400 93 500 93 1000 94 符合（β=0.05）的要求 定性检出限（LOQ） 系列浓度样本制备（有证，康彻斯坦标准品稀释） 标准曲线的制作 临界值附近浓度样本制备 样本的检测：对临界值附近浓度样本进行连续20次测定 当实验结果阳性率≥95%的最低浓度确认为检出限，表明被测物在该浓度及以上样本，实验方法将给出稳定的结果。 定性精密度（只报告阴性、阳性、无反应性） 不宜用阴性或强阳性标本衡量定性试验的重复性 选择分析物浓度应接近医学决定水平（临界值） 评价指标：临界值验证 以COI(cut-off)或以s/co值报告结果的精密度评价。 定性-重复性（精密度）-EP12A 临界值：作为判断特定疾病、状态或被测量存在或不存在的界限的量值。也就是指试验结果处于（阴性、阳性）分界点时的样品中分析物的浓度。 对纯粹的定性检测来说，临界值就是（唯一）医学决定水平。 临界值(cut-off value) 临界点:对阳性样本进行系列稀释，然后对系列稀释样本进行重复检测（20-40次），能获得50%阳性和50%阴性结果的浓度。 20次（+20%与-20%浓度各10次），30%-70% 40次（+20%与-20%浓度各20次）, 35%-65% 临界点 接近临界值浓度的分析物（临界值+20%与-20%） 对接近临界值浓度分析物的重复性检测（各20次）10天（每日测定2次）或20天（每日单次测定） 阴性、阳性质控监测数据是否有效（10天，失效≤1次；20天失控≤2次），失控后该该批数据舍弃，在当日或其他补充新一批检测。 计算阴阳性率 数据分析（C50或临界值95%区间是否正确） 定性-重复性（精密度）-EP12A 乙肝表面抗原C