2014本科免疫学应用2015-09教程解析.ppt

●抗原抗体检测 ●免疫细胞检测 ●免疫分子检测 一、抗原抗体结合 反应的特点 特异性和交叉反应 带现象与可见性 可逆性 二、抗原-抗体反应的影响因素 电解质，酸碱度，温度 抗原和抗体的性质、浓度、比例是决定因素 三、抗原抗体反应的基本检测方法 2. 酶免疫测定(enzyme immunoassay, EIA) 酶联免疫吸附试验 (enzyme linked immunosorbent assay，ELISA) ——直接法 ELISA——双抗体夹心法和间接法 biotin avidin system(BAS)——ELISA 3. 免疫组化技术(immunohistochemistry techenique) 4. 放射免疫测定法(radioimmunoassay，RIA) 5. 胶体金标记技术 6. 化学发光免疫分析 7. 免疫印迹法 (immunoblot) （一）用已知抗体检测未知抗原 ●病原体及其抗原组分：属、型、血清型 ●肿瘤抗原的定性、分型、定量与定位：AFP、CEA、体内示踪 ●红细胞血型抗原 （二）用已知抗原检测未知抗体 ●病原特异性抗体：检测HIV抗体确定HIV感染 外斐氏试验检测立克次体抗体 肥达氏反应测伤寒杆菌抗体 ●变应原抗体：体外用不同的变应原与患者血清反应确定变应原；体内用多种变应原进行皮试 ●自身抗体：组织切片，免疫荧光、免疫酶组化 ●细胞毒抗体：待移植患者血清与供体细胞混合并加入补体（补体依赖细胞毒试验，交叉组织配型） （一）体液免疫功能 ●免疫球蛋白：免疫缺陷病、免疫增殖性疾病 ●抗体水平：检测某些针对疫苗或感染因子的抗体 ●B细胞数量与功能：原发或继发免疫缺陷 （二）细胞免疫功能 ●T细胞总数与亚群：CD3、4、8、25，Th1、Th2 ●T细胞功能：增殖反应（非特异、特异）、细胞毒、皮试 （三）细胞因子及其受体和粘附分子水平 （四）非特异免疫功能 补体、NK细胞、巨噬细胞及其产物、中性粒细胞等 ●感染性疾病转归和预后：乙肝、AIDS等 ●肿瘤发展、预后与疗效判断 ●移植排斥反应的预测、药物选择、疗效评估 * 第三节 免疫分子检测 一、免疫球蛋白/抗体的测定 免疫比浊、ELISA、RIA、免疫电泳等 二、补体测定 免疫比浊、ELISA、RIA、CH50 三、细胞因子检测 1. 免疫学测定法 ●分泌性细胞因子检测：ELISA、RIA、WB ●胞内细胞因子检测：FCM、ELISPOT 2. 生物活性测定法 促进细胞增殖和增殖抑制法、抗病毒活性测定法、直接杀伤法、趋化活性测定法 3. 分子生物学测定法 PCR、实时定量PCR、RNA印迹法、核酸酶保护分析法和原位杂交法等 * 四、CD分子、表面受体和黏附分子检测 ●细胞表面分子：间接免疫荧光法、FCM等 ●可溶性分子：ELISA等 五、HLA分型 ●方法：血清学方法、细胞学方法、基因分型 ●应用：同种移植供受者配型、法医鉴定、某些疾病研究等 * 第四节 免疫学诊断与检测 * 一、疾病相关因子检测 * * 二、免疫功能检测 * 三、免疫学监测 * ●抗原与抗体特异性结合，抗体又能与抗Ig特异性结合，这一关系被用于多种检测方法。 ●抗原抗体反应分为凝集反应和沉淀反应，免疫标记技术具有灵敏度高，能定性、定量等优点，应用广泛。 ●免疫细胞具表面标志，利用抗体可鉴别不同细胞群及其数量；体外功能试验反映某一细胞群的功能，体内功能试验则反映整体免疫功能水平。 ●免疫分子的检测可采用免疫学方法、生物活性测定法及分子生物学方法。 ●了解上述基本原理后，可举一反三，根据需要选择或设计相应实验，用于基础和临床研究。 小 结 * 思考题 ●名词解释：indirect agglutinastion， ELISA， BAS，ELISPOT，double immunodiffusion， immunoblot（Western blot）， FCM，RIA ●抗原抗体反应有哪些特点？哪些基本类型？最敏感和最不敏感的方法各是哪一类？ ●可用哪些方法测定血清中Ig含量？其原理如何？ ●有哪些免疫标记技术？它们之间有何主要不同？ ●有哪些方法可检测T、B细胞的功能？细胞增殖试验和细胞毒性试验各有哪些基本方法？ * 医学免疫学第二十二章 免疫学检测原理及临床应用 * * 第一节 基于抗原-抗体反应的检测方法 ●用已知抗原检测未知抗体，诊断或辅助诊断疾病 ●用已知抗体检测未知抗原，鉴定病原体或辅助诊断疾病 ●定性或定量检测体内各种大分子物质，诊断或辅助诊断相关