基因工程4__目的基因的分离和获得及其重组基因的导入(中国药科大学生物工程所有课件).ppt

第四节 基因的分离和获得 中国药科大学 生物制药教研室 目标基因克隆的三大战略： 1.利用PCR技术或化学合成法体外直接合成目的基因，然后将之克隆、表达； 2.构建感兴趣的生物个体的基因组文库或cDNA文库； 3.利用基因差异表达获得目的基因。 构建基因文库的意义 1.通过基因文库的构建贮存和扩增特定生物基因组的全部或部分片段，保存物种遗传种质。 2.从基因文库中调出其中的任何DNA片段或目的基因。 3.构建基因文库是研究基因本身的需要,如基因结构的分析、基因表达和调控的研究等。 基因组文库的类型: 质粒文库、噬菌体载体文库、粘粒文库、细菌人工染色体文库和酵母人工染色体文库。 染色体步移(chromosome walking) 　　当基因的位置已知，但没有可用的探针，只知道同一染色体上的另外一个已经克隆的基因，就可以通过染色体步移方法克隆所需的基因。　　其基本原理是用探针筛选文库，得到阳性克隆后，将这个重组载体中的插入片段分离出来，然后用这个片段的末端部分(注意不能包含重复序列)作为新一轮筛查文库的探针；得到新的重组载体中的插入片段，同上一个插入片段的末端部分(即探针序列)是重叠的，共有的。也就是这两个片段是在同一条染色体上相互邻接的。于是，再用新得的插入片段的末端部分作为探针，再去筛选文库。通过一系列的操作，得到的插入片段逐渐连接延伸，最后可以步移到待克隆的基因。