制备回收率问题及中压Flash的纯化方法介绍资料讲解.ppt

1、为什么冲着冲着，样品一下子都出来了？ 答：梯度洗脱过程中，溶剂极性在慢慢增大（正相条件下），如果上样柱的死体积太大，而过柱时流速相对较高，导致溶剂进入上样柱后形成涡流，致使前后溶剂又一次发生混合，致使梯度不程线性变化，从而导致样品被一下子冲出来。这种情况在分离低极性样品时最常见。 2、为什么前面的峰已经出了，后面的峰型也很漂亮，可不知道为什么，后面的峰拿去做分析的时候，还能检测出前面那个峰的东西！ 答：因为上样柱死体积大，溶剂进入上样柱后，因溶剂对样品溶解性很好，溶解一部分样品，并因死体积内的溶剂形成涡流，从而使少量样品一直存在死体积里，并被不断释放。又因flash色谱仪的检测灵敏度较低，色谱出峰时无法检测出微量样品。所以表现出来的特征是，峰型很好，但后面出的峰往往杂带前峰的东西。这种情况在二氯甲烷甲醇体系中最明显。 1、上样柱：可选择20-80g的小柱子作为上样柱，将拌好硅胶的样品装入合适大小的上样柱中； 2、分离柱：根据上样量和分离度的大小，选择80-330g的空柱管填入硅胶进行分离。 重复过柱时柱子如何安装？ 空柱管及商品柱的订购 1、空柱管 2、商品柱 大流量Flash介绍 仪器配置 仪器各配置介绍 制备型输液泵：独立的双泵，既可梯度洗脱，又可等度洗脱，每个泵的流速范围均为0.1mL/min-1.2L/min。 混合器：将两个泵的流动相进行在线的混合。 紫外检测器：波长范围为200-400nm，量程为5AU，灵敏度高。可同时设置双波长检测。 色谱工作站：通过工作站来控制仪器的设置。 玻璃柱：目前安装的是150mm*1300mm的柱子，可填装硅胶为9000g，上样量为90-900g或更大量样品。并且，采用四节柱子拼接而成，柱子延长或缩短，这样可以根据样品量和分离度来方便使用，可降低成本。 Flash在反相过柱中梯度的设置 通常情况下，有些正相色谱分离不开的样品可采用反相分离。 一般能够分离开保留时间差在0.1min左右的样品； 哪种流动相体系对样品的分离度和峰型最优，就采用哪种流动相体系下进行分离，另外也要考虑样品的稳定性。 梯度设置（LCMS分析采用3min方法）： 一般情况下，初始梯度和终梯度之为30，梯度时间为12min，LCMS结果中目标峰的保留时间为RT，则终梯度为= ((100-5)/2)*RT+5-K，一般K=20。 分离过程中的经验： 1、对于一些RT2.5min的样品，K15~20之间； 2、对于一些RT1.0min的样品，K20~30之间； 3、Flash中常采用的流动相体系： Water(0.05%TFA)/ACN Water(0.05%NH3H2O)/ACN Water(10mM NH4HCO3)/ACN 4、对于一些碱性样品如果采用Water(0.05%TFA)/ACN分离峰型不好时，可以配制成0.1%TFA； 5、另外，还有一些碱性样品采用Water(0.05%NH3H2O)/ACN分离效果还是不佳时，可以尝试Water(0.05%NH3H2O+20mM NH4HCO3) 体系进行分离； 6、有些样品也可将两根柱子串联进行分离(很常用)。 反相C18柱的订购 1、C18柱 2、针头过滤器 人有了知识，就会具备各种分析能力， 明辨是非的能力。 所以我们要勤恳读书，广泛阅读， 古人说“书中自有黄金屋。 ”通过阅读科技书籍，我们能丰富知识， 培养逻辑思维能力； 通过阅读文学作品，我们能提高文学鉴赏水平， 培养文学情趣； 通过阅读报刊，我们能增长见识，扩大自己的知识面。 有许多书籍还能培养我们的道德情操， 给我们巨大的精神力量， 鼓舞我们前进。 * * * Examples to highlight how the same delta Rf can give very different outcome of the columns due to differences in the Rf values. * * 高压制备回收率问题及中压Flash的纯化方法介绍 高压制备中目标峰的回收率计算方法 在长期的分离分析工作过程中，我们总结出了一个回收率的计算方法，即：(a/b-c/d)/a/b*100%， a- 制备前样品中目标峰的纯度； b- 制备前样品中目标峰以外一个杂质峰的纯度（内标物）； c- 制备后所有的废液中目标峰的纯度； d- 制备后所有的废液中目标峰以外的一个杂质峰的纯度（内标物） 高压制备中目标峰的回收率计算方法 Standard sample: Phenol+B