如何进行献血员HIV检测.docVIP

如何进行献血员HIV检测 对献血员HIV的检测主要包括初筛试验和确认试验。初筛检测的方法有金标法、ELISA、明胶颗粒凝集试验、各种快速检测实验。其中使用最多的是ELISA，其间接法和双抗原夹心法最常用。确认试验常用免疫印迹法（WB法）。对于初筛为阳性的标本应做双孔复测，若均为阳性或一阴一阳则应做确认试验。 各项指标的实验技术原理 HIV抗体 WHO和我国卫生部推荐使用HIV感染诊断方法，是血清学抗体检测。用HIV重组抗原和羊抗鼠IgG分别固定于硝酸纤维素膜，并和包被有胶体金标记的HIV重组抗原及鼠IgG的玻璃纤维纸片及其他试剂组成。应用胶体金免疫层析技术，采用双抗原夹心的原理检测人类血清及血浆样本中的HIV 1/2抗体。仅用于无偿献血员现场初筛及临床紧急情况的使用 3、 明胶颗粒凝集试验： 原理：是使用明胶颗粒吸附HIV抗原，检测被筛查品中 HIV1/2抗体。该方法也不需仪器设备，其灵敏度高于ELISA法。 HIV抗原　在HIV感染的早期会出现一过性的抗原血症，此期间血浆中的病毒抗原是可能被检测到的，大多数感染者在随后相当长的一段时间内测不到抗原，在疾病晚期，部分患者可再次出现可检测到的抗原抗原的检测一般来说用的比较少主要是在固相上包被抗P24抗体，以捕获样品中的抗原成分，再用酶标记的另一抗P24抗体与被捕获得抗原反应，通过对酶催化显色的强度测定判断结果。第四代以重组的多肽抗原和抗 P24 抗体包被的双抗原夹心法试剂盒，可同时检测抗原抗体，使窗口期收拢了 2-3 周细胞免疫功能受损利用血球计数仪检测淋巴细胞数量，再根据流式细胞仪得到的细胞群体百分比，计算得到每微升的淋巴细胞数量Cyto-Spheres方法CD4+计数试剂盒包含CD4+微球剂，即包被有单克隆抗体的惰性乳胶微球，可以通过光学显微镜鉴别和手工计数新鲜全血中CD4+T淋巴细胞的绝对数。其原理是人和动物的T淋巴细胞表面有红细胞受体，因此红细胞可以粘附到T淋巴细胞的周围而形成玫瑰花样的细胞团。?Dynabeads方法以免疫磁珠细胞分离方法为基础，使用包被CD4+和CD8+抗体的Dynabeads磁珠，从全血中捕获分离CD4+和CD8+T淋巴细胞；另一种CD14微球用来阻隔单核细胞。用龙胆紫和胎盘兰染色分离出来的CD4+T淋巴细胞，在光学显微镜下或自动细胞计数仪上计数。HIV病毒RNA主要存在于病毒颗粒内，其定量测定主要反映了病毒存在的水平。病毒RNA的测定方法通常以定量为主. 核酸序列依赖性扩增NASBA） 原理：NASBA技术是一种等温扩增系统，其扩增基础在于系统内的混合酶系统，此系统内含有逆转录酶AMV-RT和 T7-DNA多聚酶以在体外模拟逆转录病毒核酸体内复制过程。 扩增后的产物使用NASBAQR电化学发光(ECL)系统进行检测和定量. HIV-1定量检测逆转录PCR系统(RT-PCR)：　RT-PCR方法较为简单，基本原理是通过逆转录酶的作用将样品种RNA逆转录合成DNA后进行聚合酶链式反应(PCR)。定量系统通过比较病毒核酸和QS的扩增产物量来完成，通过计算可定量病毒的拷贝数。HIVRNA定量检测的分支DNA测定法(bDNA)：分支DNA测定技术基于其独特的信号放大系统，即分支DNA信号放大系统，这是一个人工合成的分支DNA，分支DNA的分支可结合多个酶标记物，从而将病毒的信号放大，以便进行检测。　PCR是一种选择性体外扩增DNA或RNA片段的方法，在诊断方面，DNA检测通常作为辅助性检测手段 抗体 胶体金、ELISA、免疫印迹试验、明胶颗粒凝集试验、快速、简单、灵敏 抗原 ELISA法测Ｐ24抗原敏度高、特异性好，可以用于早期的判断有没有HIV感染，可以缩短窗口期可应用于HIV感染的辅助检测及病毒的基础研究。 淋巴细胞 流式细胞仪法、非流式细胞仪法 可作为间接指标。CD4+T淋巴细胞数进行记数对于HIV／AIDS的分类、诊断和进展都是非常重要 RNA NASBA、.HIV-1定量检测逆转录PCR系统HIVRNA定量检测的分支DNA测定法.可定量反应病毒存在水平，用于辅助诊断早期诊断病程监控指导治疗方案及疗效测定 DNA PCR技术 相对RNDNA检测对样品的适应性较好，更容易得到扩增的核酸产物，便于进一步分析。