霍乱弧菌中弧菌素合成酶VibF的A结构域基因的克隆、表达和纯化的研究.pdfVIP

河南农业科学 ， ， （）： ２０１２４１ ３ １４９１５３ 　 － ＪｏｕｒｎａｌｏｆＨｅｎａｎＡ ｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ 　 　 　 　 ｇ 　 霍乱弧 菌 中弧菌素合成 酶 ＶｉｂＦ的 Ａ结构域 、 基因的克 隆 表达与纯化研究 ， １ ２ ２ ２ ＊ ， ， 刘秀华 王 执 徐 素娟 　 （ ， ； ， ） 河 北 大学 生命 科学学 院 河 北 保定 山东 大学 微 生物技术 国家 重 点 实 验 室 山东 济南 １． ０７１００２ ２． ２５０１００ ： 。 摘要 弧 菌素合 成 酶 的 Ａ 结构域在弧 菌素 的合 成 过 程中发 挥 着重要 作用 使 用 ＤＮＡＳｔａｒ软 件 对 ， 。 Ａ 结构域的蛋白质 二级 结构 进 行 预 测 截 取了 多组 不同氨 基 酸 长度 的 Ａ 结 构 域 片段 使 用 ＰＣＲ ， 、 方 法从 霍乱弧 菌 Ｎ１６９６１的基因 组 中克 隆 了 Ａ 结构域基因 通过酶切 连接 等 方 法将 其 构 建到表达 （ ） ， （ ） 。 载体 ＥＴ ２１ｂ ＋ 上 并在 大肠杆 菌 ＢＬ２１ ＤＥ３ 中得到 高效表达 在 ３０个 不同氨 基 酸 长度 的 Ａ ｐ － ； 、 结构域蛋白 片段 中获得 个可溶性表达 的片段 并且 通过 三 步分 离纯化 的方 法获得 了一性状 良好 ５ （ ）， 。 均一和 高纯度 的 Ａ 结构域蛋白 Ｎ８６１－１４１０ 从 而为 Ａ 结构域蛋白质 晶体 生 长提 供 了基础 ： ； ； ； ； 关键词 霍乱弧 菌 Ａ 结构域 克 隆 表达 纯化 中图分类号 ： 文献标志码 ： 文章编号 ： （ ） Ｓ８５２．６１ Ａ １００４３２６８２０１２０３０１４９０５ 　　 　　 － － － ， Ｃｌｏｎｉｎ Ｅｘ ｒｅｓｓｉｏｎａｎｄＰｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｔｈｅＡ Ｄｏｍａｉ