猪伪狂犬病毒野毒株SYBRGreenI实时荧光定量PCR诊断试剂盒的研制.pdfVIP

河南农业科学， ， （）： ， ２０１４４３ ６ １２８１３１１４４ 　 － ＪｏｕｒｎａｌｏｆＨｅｎａｎＡ ｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ 　 　 　 　 ｇ 　 猪伪狂犬病毒野毒株ＳＹＢＲＧｒｅｅｎ 实时 　 Ⅰ 荧光定量ＰＣＲ诊断试剂盒的研制 ＊ ， ， ， ， ， 余 波 周思旋 谭诗文 徐景峨 史开志 杨 莉 　 　 （ ， ） 贵州省畜牧兽医研究所 贵州贵阳 ５５０００５ ： （ ） ， 摘要 根据 ＧｅｎＢａｎｋ 中猪伪狂犬病毒 ＰＲＶ Ｅ基因序列设计特异性的引物 ＰＣＲ扩增获得 ＰＲＶ ｇ ， ， 。 Ｅ基因片段 构建重组质粒 ＭＤ１８ Ｔ Ｅ 作为阳性标准品 对 ＳＹＢＲ Ｇｒｅｅｎ 实时荧光定量 ｇ ｐ － －ｇ 　 Ⅰ ， ， ＰＣＲ反应条件进行优化 建立猪ＰＲＶＳＹＢＲＧｒｅｅｎ 实时荧光定量ＰＣＲ诊断方法 研制诊断试剂 　 　 Ⅰ 。 ， ， （ ）、 盒 扩增产物的熔解曲线分析结果显示只出现单特异峰 无引物二聚体 对猪圆环病毒 ＰＣＶ ２ － （ ）、 （ ）、 、 （ ）、 猪细小病毒 ＰＰＶ ＰＲＶ Ｅ基因缺失株 猪源 Ｅ．ｃｏｌｉ猪瘟病毒 ＣＳＦＶ 猪繁殖与呼吸障碍综 ｇ （ ） ， ， １ ／ 。 ， 合征病毒 ＰＲＲＳＶ 均无阳性信号扩增 且重复性好 灵敏度可达 ２．３×１０ 拷贝 Ｌ 结果表明 研 μ 、 、 、 ， 制的ＰＲＶ野毒株 ＳＹＢＲＧｒｅｅｎ 实时荧光定量ＰＣＲ试剂盒特异 灵敏 快速 重复性好 适于伪狂 　 Ⅰ 犬病毒临床样品的检测。 ： ； ； ； ； 关键词 猪伪狂犬病毒 野毒株 Ｅ基因 荧光定量ＰＣＲ 诊断试剂盒