基于锁核酸探针的传感器用于BCRABL融合基因检测的研究.pdfVIP

第１７卷　第２期 电化学 Ｖｏｌ．１７　Ｎｏ．２ 　２０１１年５月 ＥＬＥＣＴＲＯＣＨＥＭＩＳＴＲＹ Ｍａｙ２０１１　 文章编号：１００６３４７１（２０１１）０２０１８００６　　 基于锁核酸探针的传感器用于ＢＣＲ／ＡＢＬ融合 基因检测的研究 汪红梅，林丽清，翁少煌，王丽满，刘银环，林新华 （福建医科大学药学院，福建 福州３５０００４） 摘要：　依据慢性粒细胞白血病ＢＣＲ／ＡＢＬ融合基因的碱基序列，设计了一种新型发夹结构锁核酸（ｌｏｃｋｅｄｎｕ ｃｌｅｉｃａｃｉｄｓ，ＬＮＡ）探针，将该探针借助Ａｕ—Ｓ键固定在金电极表面构建了特异的生物传感器．ＬＮＡ探针与目标 ２＋ 链ＤＮＡ杂交，以本实验室合成的苯甲酸二聚铜配合物（［Ｃｕ（ＣＨＯ）（ＣＨＯ）］，简称［Ｃｕ（Ｒ）］ ）为杂交 ２ ７ ５ ２ ４ ２ ６ ２ ２ 指示剂，应用差示脉冲伏安法进行检测，表现出良好的响应信号．该新型锁核酸传感器能较好的区分完全互补链 －８ －６ －１ －９ ＤＮＡ、单碱基错配链ＤＮＡ．互补链ＤＮＡ检测的线性范围为１．０×１０ ～１．０×１０ ｍｏｌ·Ｌ ，检出限２．０×１０ －１ ｍｏｌ·Ｌ ． 关键词：　发夹锁核酸探针；生物传感器；ＢＣＲ／ＡＢＬ融合基因；苯甲酸二聚铜配合物 中图分类号：　 文献标识码： Ｏ６４６　　　　 　Ａ　　　　　　　　　　　　　　 　　慢性粒细胞白血病（ＣｈｒｏｎｉｃＭｙｅｌｏｃｙｔｉｃＬｅｕｋｅ （ＬＮＡ），其结构中 Ｄ呋喃核糖的２′Ｏ，４′Ｃ位经 β ｍｉａ，ＣＭＬ）是由染色体异常的多能干细胞恶性病变 过缩水作用后形成环形的氧亚甲基桥、硫亚甲基 引起的一种疾病，其临床特征为显著的粒细胞过 桥或胺亚甲基桥，并将呋喃糖的结构锁定在Ｃ３′内 ［１］ 度生成 ．现代分子生物学研究表明慢粒白血病 型的Ｎ构型上，降低了核糖结构的柔韧性，增加了 乃因Ｐｈ染色体ｔ（９；２２）相互易位所致，其易位产 磷酸盐骨架局部结构的稳定性，形成了刚性的缩 ［９１１］ 物ＢＣＲ／ＡＢＬ融合基因出现在９５％以上的慢性粒 合结构 ．由于 ＬＮＡ与 ＤＮＡ／ＲＮＡ在结构上具 细胞白血病中，是恶性克隆的标志基因，在ＣＭＬ早 有相同的磷酸盐骨架且具有很好的刚性结构，故 ［２３］ 其对 期诊断和预后监测中具有重要意义 ．目前 ＤＮＡ、ＲＮＡ有很好的识别能力和强大的亲和 ＢＣＲ／ＡＢＬ融合基因检测的方法主要有染色体分 力［１２１４］，其与互补的ＤＮＡ、ＲＮＡ杂交后形成的双 ［４］ ［５］ 析 、ＲＴＰＣＲ技术 等，但这些方法都存在一定 链具有更强的热稳定性，因而对存在错配或缺失 的局限性． 的碱基序列识别能力更强． ＤＮＡ电化学