基因工程复习课件摘要.pptVIP

二、基因工程的基本工具 （一）“分子手术刀”— 1．来源：主要是从 中分离纯化出来的。 2．功能：能够识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的 断开。 3．结果：经限制酶切割产生的DNA片段末端通常有两种形式： 。 （二）“分子针线”——DNA连接酶 1．分类：根据酶的来源不同，可分为E·coli DNA连接酶和T4DNA连接酶两类 2．功能：恢复被限制酶切开了两个DNA片段之间的磷酸二酯键。 两种DNA连接酶(E·coli DNA连接酶和T4DNA连接酶)的比较： ①相同点：都缝合磷酸二酯键 ②区别： E·coli DNA连接酶来源于大肠杆菌，只能使黏性末端之间连接； T4DNA连接酶能缝合两种末端，但连接平末端之间的效率较低。 补充：PCR技术 利用PCR技术扩增目的基因（选修１—74页） （1）PCR的含义：是一项在生物体外复制特定DNA片段的核酸合成技术。 （2）目的：获取大量的目的基因 （3）原理：DNA复制 （4）过程： 第一步：加热至95℃，ＤＮＡ碱基对之间的氢键断裂，DNA双链拆开形成两条单链——高温变性； 第二步：冷却到55 ℃ ，使一对引物分别与两条单链DNA结合——低温复性； 第三步：加热至7２℃，在热稳定DNA聚合酶（Taq酶）的催化作用下，形成两条新的子链——中温延伸。 （5）特点：指数形式扩增 筛选出获得目的基因的受体细胞、培养受体细胞并诱导目的基因的表达 1.首先要检测转基因生物的染色体DNA上是否插入了目的基因，方法是采用DNA分子杂交技术。 2.其次还要检测目的基因是否转录出mRNA，方法是采用DNA—RNA分子杂交技术。 3.最后检测目的基因是否翻译成蛋白质，方法是采用抗原—抗体杂交技术。 4.有时还需进行个体生物学水平的鉴定。如抗虫或抗病的鉴定等。 与杂交育种和诱变育种相比，最突出的优点是：目的性强、育种周期短，克服了远缘杂交不亲和的障碍，可以培育出高产、优质或具有特殊用途的动植物品种。 五、基因工程的应用 3、基因诊断：是用放射性同位素（如32P）、荧光分子等标记的DNA分子做探针，利用DNA分子杂交原理，鉴定被检测标本上的遗传信息，从而达到检测疾病的目的。 。 4、基因治疗：将正常基因或有治疗作用的基因通过一定方式导入靶细胞内，纠正基因缺陷而达到治疗疾病的目的。主要策略有基因置换、基因修复、基因增补、基因失活等。 实例：基因如治疗镰刀型细胞贫血症。 六、蛋白质工程的概念、基本途径 1、概念：蛋白质工程是指根据蛋白质的精细结构和生物活性之间的关系，按照人类自身的需要，利用生物技术对蛋白质的ＤＮＡ编码序列或直接对蛋白质进行有目的的改造，从而创造出自然界本不存在的、具有优良特性的蛋白质分子。由于蛋白质工程是在基因工程的基础上发展起来的，在技术方面有许多和基因工程相似的地方，因此，蛋白质工程也被称为第二代基因工程。（而基因工程只能生产自然界已存在的蛋白质） 2、蛋白质工程的实质：根据蛋白质的结构与功能之间的关系，通过改造基因，以定向改造天然蛋白质，甚至创造自然界不存在的、具有优良特性的蛋白质。 3、蛋白质工程的基本途径 预期蛋白质功能→测定蛋白质三维空间结构→推测应有的氨基酸序列→推测对应的脱氧核苷酸序列→合成基因→通过转录、翻译合成具有预期功能的蛋白质。 4、蛋白质的分子设计 （1）小范围内改造：对已知结构的蛋白质进行少数氨基酸的替换。 （2）对不同来源的蛋白质拼接组装，期望转移相应的功能。 （3）蛋白质分子从头设计：就是从氨基酸的排列顺序出发，设计制造出自然界不存在的全新蛋白质，使之具有特定的空间结构和预期功能。 5、蛋白质工程的应用 （1）通过改造酶的结构，提高蛋白质的稳定性——T4溶菌酶。 （2）改变蛋白质的活性——组织纤溶酶原激活物。 （3）合成嵌合抗体——小鼠单克隆抗体和人抗体的结合。 例1 （08年全国卷理综1）已知某种限制性内切酶在一线性DNA分子上有3个酶切位点，如图中箭头所指，如果该线性DNA分子在3个酶切位点上都被该酶切断，则会产生a、b、c、d四种不同长度的DNA片段。现在多个上述线性DNA分子，若在每个DNA分子上至少有1个酶切位点被该酶切断，则从理论上讲，经该酶切后，这些线性DNA分子最多能产生长度不同的DNA片段种类数是 A.3 B.4 C.9 D. 12 例2（07年北京卷）利用外源基因在受体细胞中表达，可生产人类所需要的产品。下列选项中能说明目的基因完成了在受体细胞中表达的是 A．