第四章微生物的营养和培养基要点解析.pptVIP

附：培养基的灭菌 1. 高压蒸气灭菌 一般培养基: 1.05 Kg/cm2, 121.3℃, 15-30 min 含糖培养基: 0.56 Kg/cm2, 112.6 ℃, 15-30 min 2. 过滤灭菌 二. 培养基的种类 （一）按对培养基成分的了解作分类 １．天然培养基(complex medium; undefined medium) 概念：利用各种动植物或微生物体，包括其提取物制成的培养基，营养成分复杂丰富，无法确定确切化学组成。 主要原料：牛肉膏、麦芽汁、蛋白胨、酵母膏、玉米粉、麸皮、各种饼粉、马铃薯、牛奶、血清等。 优点：取材广泛，营养全面和丰富，制备方便，价格低廉，适宜于大规模培养微生物。 缺点：成分复杂，成分不稳定。 几种天然培养基原料的性质与成分 ２．组合培养基(defined medium) 概念：按微生物的营养要求精确设计后用多种高纯呼阿雪试剂配成的培养基。 优点：成分精确、重复性好；如高氏一号培养基。 缺点：价格较贵、配制较烦、营养贫瘠、生长慢。一般用于实验室进行营养代谢、分类鉴定和选育菌种、菌种鉴定和生物测定等定量要求较高的研究工作上。 举例： 用于大肠杆菌培养的葡萄糖铵盐组合培养基、Davis培养基等。 3．半组合培养基 (semi-defined medium) 概念：用一部分天然物质作为碳氮源及生长辅助物质，又 适当补充少量无机盐类配制的培养基。 半合成培养基应用最广，能使绝大多数微生物良好地生长。 举例： 土豆蔗糖培养基（PDA）：土豆(即马铃薯) 200g，葡萄糖20g，琼脂20g。 （一）按培养基外观的物理状态作分类 1. 液体培养基(liquid medium) 所配制的培养基是液态的，其中的成分基本上溶于水，没有明显的固形物。 液体培养基营养成分分布均匀，适用于做细致的生理代谢等各项基本理论的研究，更适用于现代化的大规模发酵生产。 2. 固体培养基(solid medium) 根据固体的性质可把其分为四类： ① 凝固培养基：加1~2%琼脂或5~12%明胶作凝固剂 ② 非可逆性凝固培养基：血清或无机硅胶 ③ 天然固体培养基：由天然固体状基质直接制成 ④滤膜：用于培养含菌量很少的水中微生物 用途：固体培养基在科学研究和生产实践上具有广阔的用途，如用于菌种的分离、鉴定、菌落计数，检验杂菌，选种、育种，菌种保藏，抗生素等生物活性物质的生物测定等，还可以用于固体发酵。 琼脂与明胶的性质比较 微生物细胞的化学组成 3. 半固体培养基(semi-solid medium) 加入少量的凝固剂到液体培养基中就配制成半固体培养基，琼脂用量一般在0.5%左右。 用途：观察细菌的运动性，鉴定噬菌体的效价和厌氧菌的培养及菌种保存等。 4. 脱水培养基(dehydrated culture media) 含除水之外的一切营养成分的商品培养基。使用时只需加入适量水分并加以灭菌，分装即可。 优点：方便培养基的制作、运输和存储，已在检验机构普及，也可用于实验室的精细实验。 （二）按培养基对微生物的功能作分类 选择性培养基(selected media) 根据某微生物的特殊营养要求或其对某化学、物理因素抗性的培养基，具有使混合菌样中的劣势菌变成优势菌的功能。 加富型选择培养基：利用分离对象对某种营养物的特殊“嗜好”，专门在培养基中加入该营养物。举例：甘露醇可富集好氧型自生固氮菌，纤维素可以富集纤维素分解菌，较浓的糖液可以富集酵母。 (2) 抑制性选择培养基：在培养基中加入某种物质以杀死或抑制不需要的菌种生长。举例：链霉素、氯霉素等能抑制原核微生物的生长，而制霉菌素、灰黄霉素等能抑制真核微生物的生长，结晶紫能抑制革兰氏阳性细菌的生长等。 2. 鉴别性培养基(differential media) 在成分中加有能与目的菌的无色代谢产物发生显色反应的指示剂，达到只须用肉眼辨别颜色就能方便地从近似菌落中找出目的菌菌落的培养基。 最常见的鉴别性培养基是伊红美蓝乳糖培养基，即EMB培养基。它在饮用水、牛乳的大肠杆菌等细菌学检验以及遗传学研究上有重要用途。 pH=7.2 1000ml 水 0.065g 美蓝 0.4g 伊红 2g K2HPO4 5g 乳糖 10g 蛋白胨 EMB培养基配方 1)伊红、美蓝对G+和部分G-抑制作用； 伊红、美蓝低酸度下沉淀起产酸指示作用； 3)大肠杆菌发酵乳糖产酸 (菌落区别于不利用乳糖的其它肠杆菌) 4)大肠杆菌产酸强 (菌落区别利用乳糖产酸弱的其它肠杆菌) EMB培养基的作用机理 G+菌受抑制 G-菌 能发酵乳糖产酸 不发酵乳糖不产酸，菌落无色透明 产酸力强，菌落呈紫绿色金属光泽 产酸力弱，菌落棕色