不同转移潜能人肝癌细胞系中GP73糖基化修饰水平比较.pdfVIP

科技导报2014，32（16） 不同转移潜能人肝癌细胞系中不同转移潜能人肝癌细胞系中GPGP7373 糖基化修饰水平比较糖基化修饰水平比较 1 2 3 1,2 张舒 ，江凯 ，茅晓意 ，刘银坤 1.复旦大学附属中山医院肝癌研究所；教育部癌变与侵袭原理重点实验室，上海200032 2.复旦大学生物医学研究院癌症研究中心，上海200032 3.复旦大学基础医学院，上海200032 摘要摘要 利用抗体亲和层析纯化不同转移潜能人肝癌细胞系中的高尔基体蛋白73（GP73），比较不同转移潜能人肝癌细胞系中 GP73糖基化修饰水平，为GP73成为肝癌标志物提供依据。纯化的GP73通过质谱鉴定后，分别进行蛋白印迹（westernblot） 和凝集素印迹（lectinblot）分析，比较其在不同转移潜能肝癌细胞系的糖基化修饰水平。实验发现，GP73含有伴刀豆凝集素 （ConA）、橙黄网胞盘菌凝集素（AAL）、小扁豆凝集素（LCA）和红腰果E型凝集素（PHA-E）识别的糖型，且单位GP73的LCA、 PHA-E识别的岩藻糖和平分型糖型含量在肝癌细胞Huh7、MHCC97L、MHCC97H、HCCLM3中有升高趋势。研究表明，单位 GP73岩藻糖和平分型聚糖结构随肝癌细胞的转移潜能升高而增多。 关键词关键词 糖基化；人肝癌细胞系；GP73；凝集素；聚糖 中图分类号中图分类号 R34 文献标志码文献标志码 A doidoi 10.3981/j.issn.1000-7857.2014.16.001 Comparison of GP73 Glycosylation in Human Hepatocellur CarcinomaCellLineswithDifferentMetastaticPotential 1 2 3 1,2 ZHANGShu,JIANGKai,MAOXiaoyi,LIUYinkun 1.KeyLaboratoryofCarcinogenesisandCancerInvasionofMinistryofEducation;LiverCancerInstitute,ZhongshanHospital, FudanUniversity,Shanghai 200032,China 2.CancerResearchCenterofInstitutesofBiomedicalSciences,FudanUniversity,Shanghai 200032,China 3.SchoolofBasicMedicalSciences,FudanUniversity,Shanghai200032,China AbstractAbstract Inthisstudy,Golgiprotein 73 (GP73)ofhepatocellulercarcinoma(HCC)celllineswithdifferentmetastaticpotentialwas purifiedbyantibodyaffinitychromatographyandthepurificationresultwasconfirmedbyLC-MS/MS,providingmoreproofforGP73 asabiomarkerforHCC.PurifiedGP73 wasthenanalyzedusingwesternblotandlectinblottoobtainitsglycosylationlevelinHCC celllineswithdifferentmetastaticpotential.WefoundthatglycanofGP73 canberecognizedbyConA,AAL,LCAandPHA-E lectins,whiletheLCAandPHA-E-reactivefractionofGP73 wasincreasedalongwiththeincreasingmetastaticpotentialofHCCcell lines. The glycan level of GP73 was different in HCC cell lines with different metastatic potential, and the content of fucose (recognizedbyLCA)andbisect