多重PCR技术快速检测烤后烟叶转基因成分.pdfVIP

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2016-05-12 发布于安徽
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多重PCR技术快速检测烤后烟叶转基因成分.pdf

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生物技术通报 ·技术与方法· BIOTECHNOLOGY BULLETIN ( ) 2015, 31 7 :64-68 多重 PCR 技术快速检测烤后烟叶转基因成分 1，2 1 1 1 1 余婧郭玉双林世锋余世洲赵杰宏（1. 贵州省烟草科学研究院烟草行业烟草分子遗传重点实验室，贵阳 550081 ；2. 贵州烟叶复烤有限责任公司铜仁复烤厂，铜仁 554300）摘要：为提高烟叶转基因成分检测效率，建立了烤后烟叶中3 种外源基因成分的多重PCR 检测技术体系，通过优化该反应体系中的Mg2+ 、dNTP、酶、引物浓度及退火温度等参数，实验最适条件为将4 对相等摩尔浓度引物预先按1 ∶1 ∶1 ∶1（V/V） rTaq 混合，在Mg2+ 为1.5 mmol/L、dNTP 为125 μmol/L、rTaq 酶 1 U、混合引物1 μmol/L，DNA 100 ng，退火温度65℃，循环数35 个的反应条件下，在一次PCR 反应中便可同时检测烟草内源基因NR，外源基因35S 启动子、NOS 终止子、NPT II 筛选标记基因。优化后的反应体系能够有效地检测出转基因烤后烟叶百分比含量为0.9%（V/V）的转基因成分。关键词：多重PCR ；烤后烟叶；转基因成分 DOI ：10.13560/ki.biotech.bull.1985.2015.07.010 A Multiplex PCR for Rapid Detection of Genetically Modified - Ingredient in Flue cured Tobacco 1，2 1 1 1 1 Yu Jing Guo Yushuang Lin Shifeng Yu Shizhou Zhao Jiehong （1. Tobacco Molecular Genetics Key Laboratory of China Tobacco ，Guizhou Academy of Tobacco Science of CNTC ，Guiyang 550081 ； 2. Tongren Factory of Guizhou Tobacco Leaf Redrying Co. ，Ltd ，Tongren 554300 ） Abstract: In order to improve the efficiency of detecting genetically modified ingredient（GMI）, we established a multiplex PCR detecting 3 exogenous gene ingredients in flue-cured tobacco. By optimizing the concentrations of Mg2+, dNTP, rTaq, and primer as well as annealing temperature in the multiplex PCR system, the result showed that the optimal conditions for the experiment were ：4 pairs of primers