落叶松APETALA2-Like转录因子基因的分离及功能分析.pdfVIP

植物遗传资源学报２０１４，１５（６）：１３０５⁃１３１１ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｌａｎｔ Ｇｅｎｅｔｉｃ Ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ ＤＯＩ：１０．１３４３０／ ｊ．ｃｎｋｉ．ｊｐｇｒ．２０１４．０６．０１９ 落叶松ＡＰＥＴＡＬＡ２⁃Ｌｉｋｅ转录因子 基因的分离及功能分析 李　 爱，李少娟，吴建强，阎国荣 （天津农学院园艺园林学院，天津３００３８４） 　 　 摘要：以落叶松转录组测序数据为基础，利用ＲＴ⁃ＰＣＲ从落叶松中分离出一个１５９０ ｂｐ 的ＡＰＥＴＡＬＡ２⁃Ｌｉｋｅ转录因子基因全 长编码序列，命名为ＬａＡＰ２Ｌ１。 蛋白质特性分析显示ＬａＡＰ２Ｌ１编码５２９ 个氨基酸，为亲水性蛋白，相对分子质量为５８．３２７ ｋＤ， 等电点为６．４５。 二级结构主要由α⁃螺旋（ａｌｐｈａ ｈｅｌｉｘ）、β⁃折叠（ｓｔｒａｎｄ）和环肽链（ｌｏｏｐ）组成。 多重序列比对和系统进化分析 表明ＬａＡＰ２Ｌ１所编码的氨基酸与黑松、云杉等亲缘关系最近。 同时，通过构建植物表达载体，利用浸花法转化模式植物拟南 芥的功能研究发现，与转空载体对照拟南芥相比，过量表达ＬａＡＰ２Ｌ１ 的转基因拟南芥的叶片、茎、花和株高都显著增大、增高， 表明落叶松ＬａＡＰ２Ｌ１转录因子可能参与了植物器官发育的调节。 　 　 关键词：落叶松；ＡＰＥＴＡＬＡ２⁃Ｌｉｋｅ；植物器官发育；拟南芥 Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ＡＰＥＴＡＬＡ２⁃Ｌｉｋｅ Ｇｅｎｅ ｆｒｏｍ Ｌａｒｉｘ ＬＩ Ａｉ，ＬＩ Ｓｈａｏ⁃ｊｕａｎ，ＷＵＪｉａｎ⁃ｑｉａｎｇ，ＹＡＮ Ｇｕｏ⁃ｒｏｎｇ （Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｈｏｒｔｉｃｕｌｔｕｒｅ ａｎｄ Ｇａｒｄｅｎ，ＴｉａｎｊｉｎＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｔｉａｎｊｉｎ３００３８４） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｂａｓｅｄ ｏｎ ｔｈｅ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｏｍｅ ｏｆ Ｌａｒｉｘ ｋａｅｍｐｆｅｒｉ，ａ １５９０ ｂｐＡＰＥＴＡＬＡ２⁃Ｌｉｋｅ ｇｅｎｅ ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ｉｎｉｔｉａｔｉｏｎ ａｎｄ ｔｅｒｍｉｎａｔｏｒ ｃｏｄｅ ｗａｓｏｂｔａｉｎｅｄｂｙ ＲＴ⁃ＰＣＲａｎｄｎａｍｅｄＬａＡＰ２Ｌ１．ＴｈｉｓｃＤＮＡ ｅｎｃｏｄｅｄａｐｒｅｄｉｃｔｅｄｐｒｏｔｅｉｎ ｃｏｎｔａｉ⁃ ｎｉｎｇ５２９ ａｍｉｎｏ ａｃｉｄｓ，ｗｈｉｃｈｆｏｒｍｅｄａ５８．３２７ ｋＤｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅｗｉｔｈ ａｃａｌｃｕｌａｔｅｄｐＩｏｆ６．４５．Ｔｈｅ ｓｅｃｏｎｄａｒｙ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｏｆ ＬａＡＰ２Ｌ１ ｃｏｎｔａｉｎｅｄ ａｌｐｈａ ｈｅｌｉｘｅｓ，ｅｘｔｅｎｄｅｄ ｓｔｒａｎｄｓ，ａｎｄ ｌｏｏｐｓ．Ａｌｉｇｎｍｅｎｔ ｏｆ ｐｒｅｄｉｃｔｅｄ ａｍｉｎｏ ａｃｉｄ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ ＬａＡＰ２Ｌ１ ｉｎ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｐｌａｎｔ ｓｐｅｃｉｅｓｓｈｏｗｅｄｔｈｉｓｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎｆａｃｔｏｒｗａｓｈｉｇｈｌｙｈｏｍｏｌｏｇｏｕｓｗｉｔｈｔｈｅｒｅｐｏｒｔｅｄＡＰＥＴＡ⁃ ＬＡ２⁃ｌｉｋｅ ｉｎ Ｐｉｎｕｓ ｔｈｕｎｂｅｒｇｉｉ ａｎｄＰｉｃｅａ ａｂｉｅｓ．Ｔｏ ｅｌｕｃｉｄａｔｅ ｔｈｅ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｏｆ ＬａＡＰ２Ｌ１，ＬａＡＰ２Ｌ１ ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｖｅｃｔｏｒ ｄｒｉｖｅｎ ｂｙ ａｎｅｎｈａｎｃｅｄＣａＭＶ３５ＳｐｒｏｍｏｔｅｒｗａｓｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄａｎｄｔｒａｎｓｆｏｒｍｅｄｔｏＡｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ ｖｉａｄｉｐｆｌｏｗｅｒ．Ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｅｍｐｔｙ ｖｅｃｔｏｒ ｃｏｎｔｒｏｌ ｌｉｎｅｓ，ｔｈｅ ＬａＡＰ２Ｌ１ ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ ｐｌａｎｔｓ ｈａｄ ｒｅｍａｒｋａｂｌｙ ｅｎｌａｒｇｅｄ ｌｅａｖｅｓ， ｓｔｅｍｓ，ｆｌｏｗｅｒｓ，ａｎｄ ｐｌａｎｔ ｈｅｉｇｈｔ，ｓｕｇｇｅｓｔｉｎｇ ａｎ ｉｍｐｏｒｔａｎｔ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｒｏｌｅ ｏｆＬａＡＰ２Ｌ１ ｉｎ ｒｅｇｕｌａｔｉｎｇ ｐｌａｎｔ ｏｒｇａｎ ｄｅｖｅｌ⁃ ｏｐｍ