鹅副黏病毒环介导等温扩增快速检测方法的建立及其应用.pdf

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2016-05-13 发布于安徽
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生物技术通报 ·研究报告· BIOTECHNOLOGY BULLETIN 2012年第11期鹅副黏病毒环介导等温扩增快速检测方法的建立及应用 1，2 1 1 1 1 鲜思美韦洪才尹强军孔维祥苏刚 1 2 （贵州大学动物科学学院，贵阳 550025 ；贵州省动物疫病研究所，贵阳 550025）摘要：参照GenBank 中登录的鹅副黏病毒（gallinacean paramyxovirus ，GPMV ）序列（AY325797 ），针对GPMV 的F 基因保守区域设计了4 条引物，通过优化反应条件，建立了检测GPMV 的逆转录环介导等温扩增技术（RT-LAMP ），并进行了特异性试验、敏感性试验及临床样本检测。结果显示，建立的RT-LAMP 方法对GPMV 阳性样品扩增产物的电泳呈特征性梯状条带，而鸭瘟病毒（DPV ）、鹅细小病毒（GPV ）、番鸭细小病毒（MDPV ）、鸭肝炎病毒（DHV ）、鸭疫里默氏杆菌（）、鸭源 Riemerella anatipestifer 沙门氏菌（）、鸡马立克病毒（MDV ）、鸡传染性支气管炎病毒（IBV ）的扩增产物电泳后均无扩增条带。建立 Salmonella anatamu 的RT-LAMP 方法对GPMV 的最低检出量为9.5 fg 的cDNA 模板，敏感性比常规RT-PCR 方法高1 000 倍。表明建立的RT-LAMP 方法特异性强、敏感性高。对6 份临床样本的检出率为100% （6/6 ），与常规RT-PCR 的符合率为100%。关键词：鹅副黏病毒逆转录环介导等温扩增技术检测 - Establishmen and Application of a Loop mediated Isothermal Amplification Method for Rapid Detection of Gallinacean Paramyxovirus 1，2 1 1 1 1 Xian Simei Wei Hongcai Yin Qiangjun Kong Weixiang Su Gang 1 2 （，， 550025 ；，， 550025 ） College of Animal Science Guizhou University G