EB病毒融合蛋白Zta-P54在大肠杆菌中的表达、纯化及其鉴定.pdf

生物技术通报 ·研究报告· BIOTECHNOLOGY BULLETIN 年第 期 2014 7 EB 病毒融合蛋白 Zta-P54 在大肠杆菌中的表达、 纯化及鉴定 1，3 1 3 3 3 2 3 2 王云龙   张春艳  李玉林  程蕾  王继创  邓黎黎  米海  白晓静 （1. 郑州大学生物工程系，郑州 450001 ；2. 郑州职业技术学院，郑州 450046 ；3. 河南省生物工程技术研究中心，郑州 450001） 摘 要 ： 为获得能用于检测试剂盒的高纯度具有活性的EB 病毒融合蛋白，以pGEX5T-BZLF1-BMRF1 质粒为模板进行PCR 扩增得到BZLF1-BMRF1 融合基因，将其插入pET32a 中，构建表达质粒pET32a/BZLF1-BMRF1。将该质粒转入大肠杆菌培养，经 IPTG 诱导获得Zta-P54 融合蛋白。用DEAE-Sepharose CL-6B 和Ni-NTA 亲和层析纯化，并通过SDS和Western blot 对Zta-P54 融合蛋白进行鉴定。双酶切鉴定和测序结果显示成功构建pET32a/BZLF1-BMRF1 质粒，SDS显示该蛋白相对分子量约为60 kD ，与预期结果一致。纯化后获得纯度为96.5 % 的Zta-P54 融合蛋白。Western blot 检测该蛋白有良好的生物活性和反应特异性。因此， 成功构建pET32a/BZLF1-BMRF1 质粒，在大肠杆菌中可溶性表达。最终获得纯度高、生物活性好的融合蛋白。 关键词 ： EB 病毒 Zta-P54 融合蛋白 原核表达 蛋白纯化 - ， Expression Purification and Identification of Zta P54 Fusion Protein in - Escherichia coli of Epstein Barr Virus 1，3 1 3 3 3 2 3 2 Wang Yunlong Zhang Chunyan Li Yulin Cheng Lei Wang Jichuang Deng Lili Mi Hai Bai Xiaojing （1. Bioengineering Dep artment ，Zhengzhou University ，Zhengzhou 45000 1 ；2. Zhengzhou Technical College ，Zhengzhou 450046 ； 3. Henan Biotechnology Research Center ，Zhengzhou 45000 1 ） Abstract:  It was to obtain high purity and active epstein-barr virus fusion protein and use for detection kit. The f