牛转FAD3B基因胎儿成纤维细胞中内参基因的稳定性评估.pdfVIP

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2016-05-13 发布于安徽
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牛转FAD3B基因胎儿成纤维细胞中内参基因的稳定性评估.pdf

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生物技术通报 ·研究报告· BIOTECHNOLOGY BULLETIN 2012年第11期牛转 FAD3B 基因胎儿成纤维细胞中内参基因的稳定性评估 1 2 1 2 1 1 2 王子东苏建国段彪杨春荣高广琦康峰张荣芳 1 1 1 胡晓明扈廷茂李光鹏 1 （内蒙古大学哺乳动物生殖生物学及生物技术教育部重点实验室，呼和浩特 010021 ； 2 西北农林科技大学动物科技学院，杨凌 712100）摘要：采用RT-PCR 扩增亚麻种子（ Linn ）FAD3B 基因，构建不同启动子的两种重组真核表达载 Linum usitatissimum 体pIRES-AcGFP-CMV-FAD3B 和pIRES-AcGFP-CAG-FAD3B ，通过qRT-PCR 检测转基因细胞中FAD3B 基因的表达水平。以不同过表达水平的转基因细胞为试验对象，评价9 种候选内参基因ACTB、GAPDH、18S rRNA 、UXT 、PPP 1R11、RPS15A 、SF3A 1、 EEF1A2 和HMBS 的稳定性。根据GeNorm 、NormFinder 和BestKeeper 3 种统计学算法得到的稳定性值对基因进行排序。结果显示，内参基因稳定性的综合排序为PPP 1R11EEF1A218S rRNARPS15AGAPDHHMBSUXTACTBSF3A 1，其中PPP 1R11 和 EEF1A2 是最稳定的内参基因。稳定内参的选择可以更加准确地校正基因的表达水平，从而为阐述基因的功能奠定了坚实的基础。关键词：实时荧光定量RT-PCR 转基因细胞内参基因 GeNorm NormFinder Bestkeeper Evaluations of Reference Genes in Bovine Transfected FAD3B Gene Fetal Fibroblasts 1 2 1 2 1 1 Wang Zidong Su Jianguo Duan Biao Yang Chunrong Gao Guangqi Kang Feng 2 1 1 1 Zhang Rongfang Hu Xiaoming Hu Tingmao Li Guangpeng 1 （