太平洋牡蛎i型溶菌酶基因的克隆及重组高效表达.pdfVIP

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2016-05-13 发布于安徽
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太平洋牡蛎i型溶菌酶基因的克隆及重组高效表达.pdf

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生物技术通报 · · BIOTECHNOLOGY B ULLETIN 20 11 4 研究报告年第期 i 太平洋牡蛎型溶菌酶基因的克隆与重组高效表达谢三群丛丽娜张欢王丹 ( ， 116034 ) 大连工业大学生物工程学院大连 : ， (Lysozyme) ，摘要在双壳类软体动物牡蛎体内溶菌酶在实现宿主免疫防御破坏和消除侵入体内的病原中发挥着重。 GenBank cDNA (GenBank :AB179775)， RT-PCR ，要的作用根据已有的太平洋牡蛎溶菌酶的全长序列通过技术从太平洋牡 (Crassostrea gigas) ( CgLys) (open reading frame ，ORF) 。蛎中克隆得到溶菌酶简称为基因的开放阅读框序列生物信息软件分， ORF 4 14 bp ， 137 (aa)，20 aa ， 117 aa ， 13. 2 kD 。析表明其为编码个氨基酸前个为信号肽成熟肽由个组成其分子量为通过， CgLys i 。 CgLys 构建分子系统发育树对其同源性进行分析比较初步推断该属于型溶菌酶将该基因的成熟肽亚克隆进原核 pET-32a (+) ， pET32a (+)-CgLys ， BL21 (DE3)pLysS 。 IPTG 表达载体中构建重组质粒再转化至大肠杆菌该基因工程菌经诱导， CgLys ， 18 kD 。 CgLys ，发酵后成功高效地表达了重组蛋白其分子质量约为该重组蛋白主要存在于细菌裂解液的上清液中。，。即以可溶性蛋白形式存在上述结果将显著简化后续的蛋白纯化过程为今后扩大规模生产牡蛎溶菌酶提供参考 : i 关键词无脊椎动物太平洋牡蛎型溶菌酶重组表达纯化