SMAP-29抗菌肽的原核表达、纯化及其活性检测.pdfVIP

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2016-05-13 发布于安徽
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SMAP-29抗菌肽的原核表达、纯化及其活性检测.pdf

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生物技术通报 ·研究报告· BIOTECHNOLOGY BULLETIN 年第期 2013 3 SMAP-29 抗菌肽的原核表达、纯化及活性检测郑秋实段晨曦陶凤云（北京联合大学生物化学工程学院，北京 100023）摘要：旨在利用基因工程技术表达出有活性的重组SMAP-29 抗菌肽。根据大肠杆菌偏好的密码子优化 - 基因序 smap 29 列，在目标肽序列N 端添加肠激酶识别位点，C 端添加终止密码子，化学合成基因序列，通过 R I 和 d III 双酶切位点连接 Eco Hin 到pET-28a （+ ）上构建重组表达载体，在大肠杆菌BL21 （DE3 ）中表达重组蛋白，Ni-NTA 亲和层析纯化，肠激酶切割后释放出 SMAP-29 抗菌肽，检测其抗菌活性。结果显示，带有6 ×His 标签及肠激酶识别位点的SMAP-29 重组融合蛋白在大肠杆菌中以包涵体形式表达，利用Ni-NTA 亲和层析可获得纯化的融合蛋白，肠激酶切割后释放出的SMAP-29 重组抗菌肽对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和白念珠菌的最小抑菌浓度依次为10 、20 和40 μmol/L。关键词：抗菌肽 SMAP-29 原核表达抗菌活性， Recombinant Expression Purification and Antimicrobial Activity of - SMAP 29 Zheng Qiushi Duan Chenxi Tao Fengyun （， 100023 ） Biochemical Engineering College of Beijing Union University Beijing Abstract: It was to express active recombination SMAP-29 antibacterial peptides by genetic engineering technology. Optimization smap- 29 gene sequences according to Escherichia coli preference codon usage and adding enterokinase recognition sites at N-terminus and stop codon at C-terminus of the target peptide sequence. The DNA sequence was synthesized by chemical technology and inserted i