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生物技术通报
·研究报告· BIOTECHNOLOGY BULLETIN 年第 期
2012 1
糖化酶、木聚糖酶融合蛋白在毕赤酵母中的高效表达
1 1 3 1,2 1,2 1 1
王智 顿宝庆 顾金刚 赵萱 田谷 路明 李桂英
1
（中国农业科学院作物科学研究所 国家农作物基因资源与基因改良重大科学工程 中国农业科学院生物质能源研究中心，北京 100081 ；
2 3
东北农业大学生命科学学院，哈尔滨 150030 ； 中国农业科学院农业资源与农业区划研究所
中国农业微生物菌种保藏管理中心，北京 100081）
-
摘 要 ： 通过 RT PCR 方法，以埃默森篮状菌（Talaromyces emersonii ）总RNA 为模板，克隆出糖化酶（glucoamylase ，amyA ）
-
基因的成熟肽编码序列 （1 857 bp ），编码 618 个氨基酸；以类芽孢杆菌（ sp. ）H10 3 基因组 DNA 为模板，克隆出木聚糖酶
Paenibacillus
- - -
（xylanase A ，xynA ）基因的成熟肽编码序列（636 bp ），编码 211 个氨基酸。通过重叠延伸 PCR （SOE PCR ）得到拼接片段amyA l
- - -
xynA ，并将其克隆到毕赤酵母表达载体 pPIC9 中，得到重组质粒 pPIC9 amyA l xynA ，重组质粒线性化后经电击转化到毕赤酵母（
Pichia
pastoris ）GS115 中，得到了表达成功的工程菌 ALX2 。在 ALX2 发酵上清液中同时检测到糖化酶活性（10.7 U/mL ）和木聚糖酶活性
（51.8 U/mL ）。
关键词 ： 糖化酶 木聚糖酶 融合
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