戊二胺的生物合成李治.pptxVIP

——生物制药技术;戊二胺的简介和其生理作用及工业应用; 戊二胺在关闭孔蛋白通道和保护大肠杆菌免受氧的毒害方面也起着重要的作用；内源性戊二胺的分泌以及胞内高浓度戊二胺积累可导致外膜渗透性降低，抑制某些抗生素如头孢霉素类抗生素的作用。在农业上，外源施加戊二胺可以改善坐果和 促进果实发育，提高果实的产量；在医学上，它也可作为一种有效治疗痢疾的药物；在工业上，戊二胺与二元酸进行聚合反应可合成优质高分子材料——新型尼龙。 ;简述几种戊二胺的合成方法;1.实验室的制备 采用戊二腈为原料，把戊二腈的无水乙醇溶液煮沸之后，快速加入金属钠，反应完之后向其中加入水，蒸出乙醇，剩余反应物采用过热蒸汽蒸馏。蒸出的馏出物用稀盐酸中和、蒸干，剩余物用冷无水乙醇洗涤，再用少量固体氢氧化钾和水分解所得的盐酸盐，蒸去水，减压蒸馏，即可得到戊二胺。西北大学李崇等人采用非晶态镍催化剂在戊二腈上催化加氢来制备戊二胺，取得不错结果。 ;3.微生物转化法 微生物转化法主要是利用底物赖氨酸在赖氨酸脱羧酶的催化下脱去羧基生成戊二胺。L-赖氨酸脱羧酶存在于 E.coli、尸杆菌等大多数微生物中，一些高等植物中也有。日本太卡哈斯等通过游离大肠杆菌 L-赖氨酸脱羧酶用 D, L-赖氨酸作为底物以不对称降解 L-赖氨酸的方式得戊二胺和 D-赖氨酸。该反应步骤多，产物分离过程复杂，成本高，产率低(38 %)。日本东丽尖端融合研究所用高效表达大肠杆菌来源的赖氨酸脱梭酶的大肠杆菌高效率生成戊二胺。;4.微生物直接生产法 日本东丽尖端融合研究所通过对赖氨酸工业生产上所用的谷氨酸棒杆菌进行转基因操作，又开发了从葡萄糖生产戊二胺的技术。可以用高丝氨酸脱氢酶基因被破坏的、用来发酵生产赖氨酸的谷氨酸棒状杆菌菌株为宿主，把来源于大肠杆菌的赖氨酸脱梭酶基因的表达单元插入高丝氨酸脱氢酶基因座。通过玻璃发酵罐的发酵试验发现，培养 15 小时可以生产出 2.5 g/L 戊二胺。目前，通过基因工程筛选得到的谷氨酸棒状杆菌是生产戊二胺的最好菌株。生物法生产戊二胺需要解决的首要问题是提高该菌株???高浓度产物的耐受性。;传统化学催化合成戊二胺法;(Li chong, et al., 2007, petrochemical technology );发酵生产微生物代谢途径及其发酵酶转化生产流程; 微生物转化法生产尸胺的过程可分为菌体发酵培养过程（产酶过程）、底物与菌体转化反应过程和产物尸胺的分离提取精制过程。日本东丽尖端融合研究所用高效表达大肠杆菌来源的赖氨酸脱羧酶高效率生成尸胺。其流程如下： (1) 将大肠杆菌中 cad A 基因进行 PCR 扩增，然后连入到pUC18中，将质粒转入宿主菌大肠 JM109 菌株中，利用卡那霉素筛选出转化子。 (2) 将E.coli JM109 pcad A 菌株在培养基中进行培养，种子液接入的培养基中，在发酵罐中进行培养。经培养，培养物转入发酵罐中继续培养，培养之后加入IPTG(溶于水中)诱导，再继续培养。 (3) 培养结束后经离心来收集菌体，可得到湿菌体，再将底物和湿菌体加入到反应器中进行转化反应。并不断向其中流加己二酸，目的是中和产生的戊二胺，使pH维持在6.0左右，尸胺转化率可达到 98%。 (4) 反应液离心除去菌体，在上清液中加入活性炭并在 20 ℃下搅拌进行脱色，然后过滤除去活性炭，滤液再减压浓缩。然后，在4℃冰箱中冷却析出晶体。离心收集晶体，于减压干燥器中干燥数天。 (5) 将所得干燥的晶体经 X 射线衍射分析，结果发现，晶体是按戊二胺:己二酸摩尔比为 1:1的方式而形成的结晶，晶体纯度达到 99 %或更高，可直接进行聚合反应生产尼龙。;发酵液中戊二胺的提取和精制;戊二胺的蒸发、蒸馏提取;上图为山东凯赛生物材料有限公司拍摄