UPLC标准操作规程详解.pptxVIP

H-Class液相色谱仪标准操作规程 CH-A 带有主动预热器的高温柱温箱 SM-FIN 一种进样模式-直接进样 更简单-只需要输入进样体积 更卓越的进样精度 四元溶剂管理系统 四元低压混合溶剂系统 支持UPLC方法 系统体积小 H-Class的标准操作规程 准备流动相（2.1） 开机自检（2.2） ACQUITY QSM的准备 （2.3） SM FTN的准备（2.4） 色谱柱预热稳定器（2.5） 启动检测器（2.6） 样品的制备（2.7） 关机（2.8） 2.1 开机前准备流动相 1.有机溶剂要求用色谱纯（进口品牌最好） 2.水或缓冲盐流动相要用超纯水（18.2MΩ），当天配制。 3.H-Class对洗针液的要求 清洗液（purge solvent）用纯水或含少量甲醇或乙腈水溶液 清除液(wash solvent)用较高比例的甲醇/水或乙腈水 4. 清洗柱塞密封圈的溶液 超纯水5～10%甲醇 特别提示：以上溶剂或溶液均需： 用0.22um的膜过滤并脱气，用洁净的玻璃容器盛放，避免污染 推荐使用的添加剂 0.2%甲酸 0.1%TEA 10mM磷酸盐 50mM铵盐 0.1%EDTA 0.1%TFA 0.1%六氟丁酸 10mM碳酸氢铵 50mM乙酸铵 2.2 ACQUITY H-Class开机操作 1. 打开计算机电源，进入windows操作系统； 2. 如果有网络路由器，打开switch电源； 3. 打开ACQUITY H-Class QSM和SM-FTN电源； 4. 先不要打开TUV或PDA电源 光学检测器的电源需待流动池内充满液体后再打开； 5. 待各种仪器设备通过自检后（绿灯常亮），打开Empower软件； 6. 输入用户名及密码后进入Empower主画面 打开样品采集画面 进入样品采集界面 控制台 打开控制台界面 在sample manager FTN 控制面板上，单击控制台图标，打来控制台窗口，如下图。 2.3 AQUITY QSM的准备 灌注柱塞杆清洗液 选择controlprime seal wash，点击即开始，再点击一下即结束。 以下情况需要做此操作，例如： 新安装仪器或泵流路中溶液走干了 当泵几个小时或更长时间未用 用过缓冲盐液流动相之后 注意： 为避免螺线阀座和密封垫的损坏，不要使用非挥发性的缓冲液作为seal wash的溶剂。 为避免污染，请勿循环使用seal wash 溶剂。 推荐： seal wash 溶剂中有机相比例不要超过10%； Prime seal wash前请检查溶剂是否足够。 2.3 AQUITY QSM的准备 QSM 湿灌注 灌注四元溶剂管理器 用于排除泵头及管路中的气泡 用于更换从储液瓶到溶剂管理器之间的溶剂 在下列情况下需要prime四元溶剂管理器 启动新的四元溶剂管理器或新的系统 停机4个小时后再次开机 更换流动相 在controlprime solvents选择A,B,C,D按Start按钮。 2.4 SM FTN的准备 灌注进样针和洗针流路 SM FTNcontrolPrime选择wash solvent和purge solventOK 提示： 确保用于灌注的溶剂有合适的组成 所有的试剂瓶都要使用滤头，并确保溶剂体积足够用于做灌注 推荐（反相条件下）： Wash solvent中有机溶剂的比例范围为50%～100%甲醇； Purge solvent中溶剂的比例和组成与梯度的初始条件一致，或0～25%的甲醇。 不推荐缓冲盐作为purge solvent。 2.4 SM FTN的准备 在控制台的sample manager窗口，单击controlwash needle 2.7 样品的配制 用以下方法的一种或几种组合制备样品 固相萃取 用0.22μm滤膜过滤 沉淀蛋白 液液萃取后用0.2μm膜过滤 离心（高于8000rpm离心20min并将上清液用0.2μm膜过滤转移至新样品瓶） 推荐的样品稀释剂 甲醇 超纯水 乙腈 异丙醇 乙醇 二甲基亚砜 N,N-二甲基甲酰胺 不建议的样品稀释剂 二氯甲烷 氯仿 乙酸乙酯 氯化溶剂 甲苯 5%的强酸 提示：不要使用非Waters指定的样品瓶以及瓶盖，以免损坏进样针 2.8 关机 用超纯水置换缓冲盐流动相，清洗色谱柱及系统（100倍柱体积） 待系统中缓冲盐冲洗干净，用乙腈/水冲洗系统 用纯有机溶剂（乙腈或甲醇）充满系统 缓慢降低流速至零后，关闭检测器以及SM-FTN、QSM的电源 退出Empower软件，关闭计算机 H-Class的日常清洗 当出现以后几种情况时，需要对UPLC进行清洗 UV系统下，噪音或基线漂移增加时 MS系统下，信噪比或灵敏度降低时 当灯能量低时 分析生物样品时，进样量太大 清洗